Bacterias Microbiologia

MÁSTER DE MICROBIOLOGÍA






Técnicas Avanzadas:
PRÁCTICAS DE VIROLOGÍA


CURSO 2009/2010





DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID




NOMBRE DEL ALUMNO:

Firma:



NORMAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA


Presentación por el Instructor
- Recordar los grados de peligrosidad biológica
- Distintos niveles de seguridad.
- Tipos de precaucionesen cultivos.

NORMAS
- Está prohibido comer, beber o fumar en los laboratorios de cultivos.
- Está prohibido pipetear con la boca.
- Es obligatorio el uso de bata.
- Es obligatorio lavarse las manos antes de empezar el experimento con el material biológico (evita contaminaciones) y cuando se sale del laboratorio.
- Todo el material biológico (células y virus, y en especial estos últimos)debe inactivarse con lejía antes de tirarlo.
- Los cultivos celulares no infectados por virus deberán manipularse en las mismas condiciones de seguridad que aquellos infectados.
- Se debe trabajar siempre con material estéril (puntas, botellas,...).
- La mesa se descontaminará antes y después del trabajo experimental. El material biológico derramado debe ser inactivado inmediatamente conhipoclorito.
- A falta de cabinas de seguridad biológica para todos, se deberá trabajar siempre cerca de la llama.




PROCESAMIENTO DEL MATERIAL Y LIMPIEZA


- Vasos de precipitado grandes con hipoclorito (lejía).
- Todo material que haya estado en contacto con células o virus se debe retirar añadiéndole lejía, y poniéndolo en la zona de material sucio.
- Luz ultravioleta al final del día.- TODOS LOS DÍAS, al terminar la práctica, se debe limpiar la mesa con lejía y etanol. Así se conseguirá tener un ambiente más propicio para empezar la práctica al día siguiente.
- Lavarse las manos con jabón a menudo. Y, por supuesto, al final de cada día de prácticas.







PRÁCTICAS DE VIROLOGÍA

Título de las prácticas

1.- Pases y siembras de células animales. Recuentos.
2.-Inoculación con virus. El efecto citopático (ECP).
3.- Inhibición del ECP por antivirales.
4.- Valoración de virus por formación de placas de lisis.
5.- Localización subcelular de antígenos virales por inmunofluorescencia.
6. Diagnóstico de virus por ELISA.





EQUIPO INVENTARIABLE MATERIAL FUNGIBLE


Genérico y Prácticas 1-3
Incubadores - Medio Dulbecco (DMEM)
Microscopiosinvertidos - Suero fetal de ternera (FCS)
Microscopio de Fluorescencia - PBS
Cabinas de flujo laminar - Placas de cultivo P60, P100 y M-24
Vortex - Tubos de diluciones
Centrífuga de células - Frascos lavadores
Nevera - Puntas azules y amarillas
Congelador -20ºC - Tubos Eppendorf
Balas de CO2 con manoreductor - Pipetas
Lector de placas multipocillos - Pipeteadores de cabina
- Lejía.Alcohol. Papel Albal
- Jabón. Papel de filtro y servilletas
- Bolsas de basura autoclavables
- Cámaras de Neubauer para contar células
- Sulfato de dextrano

Práctica 4
Agar
Medio Dulbecco 2x
Formaldehido
Cristal violeta


Práctica 5
Portaobjetos para Inmunos
Cubreobjetos circularespara Inmunos
Anticuerpos Primarios contra Virus MVM
Anticuerpo anti-Rabbit con Texas-Red
Anticuerpo anti-Mouse con Fluoresceina
Mowiol
Metanol
Acetona


Práctica 6
Antígeno
Anticuerpo primario (policlonal de conejo)
Anticuerpo secundario (cabra anti-conejo conjugado a peroxidasa de rábano, HRP)
Sustrato para HRP
PBS, Tween 20
Microplacas de 12pocillos
Agua destilada
Tubos Eppendorf








ORGANIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS



El guión debe ser completado por cada alumno.


Plan de trabajo experimental.

Lunes Práctica 1: Sembrar las células para las prácticas 2, 3, 4 y 5.


Martes Prácticas 2, 3 y 5: Infectar.


Miércoles Prácticas 2, 3: Ver el efecto citopático.
4: Hacer diluciones e Infectar.
5:...