Microbiologia general-determinación del número de bacterias de una muestra

PRÁCTICA Nº 05: DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE BACTERIAS DE UNA MUESTRA: TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP).
I. OBJETIVOS:
* Determinar el número de coliformes totales y fecales presentes en el alimento, por la técnica del número más probable.
* Determinar si hay producción del gas en el tubo de acuerdo a eso considerar, gran positivos o gran negativos en lamuestra realizada.
* Analizar la naturaleza del alimento realizado como en este caso como muestra tenemos leche fresca
* Determinar la calidad del alimento que tuvimos como muestra, leche fresca
II. FUNDAMENTO TEÓRICO:
Esta técnica se basa en la presunción de que las bacterias se hallan normalmente distribuidas en un medio líquido, esto es, que las muestras repetidas del mismotamaño de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo número de gérmenes como promedio, naturalmente algunas de las muestras pueden contener algunos gérmenes mas o menos. La cifra media es el número más probable. Si el número de gérmenes es grande, la diferencia entre las muestras serán pequeñas; todos los resultados individuales estarán próximos a la media. Si el número de gérmenes espequeño, las diferencias, hablando relativamente serán mayores.
Es posible calcular el número más probable de gérmenes/100ml. con cualquier combinación de resultados obtenidos de tales muestras. Se han hecho tablas para muestras de 10 ml, 1 ml y 0,1 ml, utilizando cinco o tres tubos para cada tamaño de la muestra y, para determinaciones en agua, utilizando una muestra de 50 ml.
La presencia decoliformes fecales y Escherichia coli se usa para indicar una contaminación potencialmente peligrosa por el hecho de que el habitad natural de estos microorganismos son las heces humanas y de animales de sangre caliente.
III. MATERIALES Y EQUIPOS:
a) Los requeridos para la preparación y dilución de muestra de alimentos.
b) Incubadora a 35-37 ºC.
c) Pipetasbacteriológicas de 1 ml.
d) Asa de Siembra.
e) Medios de Cultivo:
* Caldo Verde Brillante (Caldo BRILA), volúmenes de 10 ml. en tubos de 150x15mm., conteniendo tubos de fermentación invertidos (75x10mm.).
* Caldo Laurilsulfato (LST), volúmenes de 10 ml. en tubos de 150x15mm., conteniendo tubos de fermentación invertidos.
* Agar Eosina Azul de Metileno(EMB) o Agar Endo.
f) Material Biológico:
* Leche fresca
IV. PROCEDIMIENTO:
Primeramente se prepara la muestra de leche con dilución (10-1,10-2 ,10-3

0.5 ml de leche mas 0.5 ml de leche 0.5 ml de leche4.5 ml de agua destilada 4.5 ml de agua destilada 4.5 ml de agua destilada


10-110-1 10-2 10-3

Agregar 1ml de caldo brila a cada tubo Agregar 1ml de caldo brila a cada tubo Agregar 1ml de caldo brila a cada tubo10-1 10-2 10-3







* Incubar los tubos a 37ºC por 24 a 48 horas.
* para...