Biblioteca genomica

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AlumnO: LUIS VARELA RODRIGUEZ

7.2 BIBLIOTECAS cDNA 7.3 BIBLIOTECAS EXPRECION

RESUMEN
Bibliotecas de cDNA.
Se puede construir una biblioteca que represente losgenes que se están transcribiendo en una célula eucariótica en un momento dado, utilizando el mRNA aislado de esa célula. Casi todas las moléculas de mRNA eucariótico tienen una cola de poli-A en suextremo 3'. Primero, se hibrida la población de moléculas de mRNA que tienen colas de poli-A 3' con oligo-dT (DNA corto de cadena sencilla formado sólo por desoxitimidina).

La secuencia de oligo-dThibrida con la cola de poli-A, y sirve de cebador para la síntesis de una cadena complementaria de DNA utilizando la enzima retrotranscriptasa. Esta enzima es una DNA polimerasa dependiente de RNA quecopia un molde de RNA de cadena sencilla en un DNA de cadena sencilla. El resultado es un dúplex RNA – DNA de doble cadena. La cadena de RNA se elimina tratándola con la enzima ribonucleasa H. Entonces,la cadena sencilla de DNA se utiliza como molde para sintetizar la cadena complementaria de DNA, utilizando la DNA polimerasa I.
El extremo 3' de la cadena sencilla de DNA se dobla sobre sí mismoformando una horquilla (un lazo), por lo que puede servir de cebador para sintetizar la segunda cadena. El resultado es un DNA dúplex con las cadenas unidas por un extremo. La horquilla puede abrirseutilizando la enzima nucleasa S1 obteniéndose una molécula de DNA de doble cadena (denominada DNA complementario o cDNA), cuya secuencia nudeotídica deriva de una molécula de RNA.

Si se añade untrozo corto de DNA con sitios de restricción en cada uno de sus extremos, el cDNA puede clonarse. Este sitio de clonación puede cortarse con la enzima de restricción adecuada, produciendo extremoscohesivos, lo que permite que el cDNA se inserte en el sitio de restricción de un vector plasmídico o fágico.

Una biblioteca de cDNA es diferente a una biblioteca genómica ya que representa sólo un...
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