Biología Molecular

1 Protocolos de extracción de ADN total de mariposas utilizando el Kit de Promega: Wizard sv Genomic DNA Purification System.

1. Materiales -Pipetas de 2-20uL, de 20-200uL y de 100-1000ul - Bañode María -Incubadora - Centrifuga para tubos de 1,5 ml, que alcance 14000 rpm -Vortex - Juego de disección, que incluya: una tijera pequeña, una pinza entomológica y un bisturí - Congelador (-20°C) -Cámara de electroforesis horizontal -Tubos de 1,5ml -Guantes de látex sin polvo.

2. Reactivos -Kit de extracción de ADN: Wizard sv Genomic DNA Purification System -Proteinasa K (20mg/mL) -Etanol 96%-TE (10:1) -RNasa (10mg/mL)

3. Preparación de soluciones A) Solución de digestión Reactivo Nucleic Lysis solution EDTA 0,5M (pH=8,0) Proteinasa K (20mg/mL) RNasa solution Cantidad para unaextracción 200uL 50uL 20uL 5uL

Nota: Mezclar bien todos los reactivos. Preparar el mismo día de uso. Almacenar en frio mientras se utiliza.

Protocolos de laboratorio UEG 2009

Por: Duina Posso Duque2 4. Protocolo 1) Poner 20mg del tejido utilizable en un tubo de 1,5mL. 2) Agregar 275uL de la solución de digestión. 3) Picar el tejido con la tijera hasta tener trozos muy pequeños. 4) Incubar a55°C durante toda la noche. 5) Centrifugar a 4500rpm durante 3 min, a temperatura ambiente. 6) Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo. Esto se hace por inversión. 7) Agregar 250 uL del bufferWizard sv Lysis. Mezclar con vortex. 8) Transferir todo a la columna ensamblada con el tubo colector. 9) Centrifugar a 13000rpm durante 3min, a temperatura ambiente. 10) Descartar el líquido del tubo derecolección y volver a poner la columna en él. 11) Agregar 650uL de la solución Wizard sv Wash a la columna. 12) Centrifugar a 13000rpm durante 1 min, a temperatura ambiente. 13) Descartar el líquidodel tubo de recolección y volver a poner la columna en él. 14) Repetir los pasos de limpieza 8-9 tres veces. 15) Centrifugar una vez más a 13000rpm durante 2 min, a temperatura ambiente. 16)...