Biologia celular

Análisis de ciclo celular por citometría de flujo
La cuantificación del contenido ADN permite determinar la distribución de una población celular a lo largo de las distintas fases del ciclo celular.Los estudios de ciclo celular tienen gran relevancia en varias áreas de la biología celular y la biomedicina. Este tipo de estudios se realizan de manera rutinaria para detectar la presencia deanomalías en el contenido genético de poblaciones celulares (aneuploidias), para determinar agentes que promueven o retardan la proliferación celular y para cuantificar la proporción de muerte porapoptosis. La distribución celular de una población se analiza por citometría de flujo utilizando colorantes de ADN que incrementan su fluorescencia tras su unión al ácido nucleico. La cantidad de coloranteunido es proporcional a la cantidad de ADN, y por tanto la luz recogida en el citómetro es proporcional a la cantidad de ADN de cada célula.

Los colorantes de ADN más utilizados para la medida delciclo celular en citometría de flujo son: • Yoduro de propidio: es el colorante utilizado con mayor frecuencia para determinaciones de contenido de ADN por citometría de flujo porque su excitación selleva a cabo con líneas de láser de luz azul (las más comunes en los citómetros de flujo). Este colorante es un intercalante de ADN y ARN de doble cadena. Su utilización para la determinación delcontenido de ADN requiere de la utilización de agentes permeabilizantes y del tratamiento con ARNasa. • Hoechst 33342: es un colorante permeable a la membrana plasmática que se utiliza para determinar elcontenido de ADN en células vivas. Es un colorante específico de ADN y tiene una unión preferente por las bases A-T. Se utiliza con menor frecuencia que el yoduro de propidio porque requieren de ladisponibilidad de un citómetro con fuente de iluminación ultravioleta. • Dapi: Es el colorante que permite obtener mayor precisión en la medida de ADN porque produce histogramas con coeficientes de...