Biologia

EXPERIMENTO 4

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACÁRIDOS Y POLISACARIDOS)

REQUISITOS Repasar las estructuras de los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos OBJETIVOS Identificar por métodos colorimetritos cuantitativos los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos

1.

FUNDAMENTOS

Los carbohidratos estándistribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del numero de átomos de carbono que posee y la función aldehídica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y cuantificación. Cuando el carbohidrato esta formado por una solamolécula de carbohidrato, se denomina monosacárido, por dos, disacárido y por mas de dos, polisacárido. Los disacáridos son azucares formados por la unión de dos monosacáridos mediante el enlace glucosídico. Si este enlace se efectúa entre dos carbonos anoméricos, el disacárido no tendrá el potencial aldehído o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren laparticipación de estos grupos, recibiendo el nombre de azúcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacáridos no reductores (ver anexos). Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre, darán positivas estas reacciones, llamándose azucares reductores, debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayoría de los disacáridoscarecen de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacáridos como la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la 47

hidrólisis de polisacáridos, la maltosa, por ejemplo, es el producto de la hidrólisis del glucógeno y el almidón. Los polisacáridos, si son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energíametabólica de fácil aprovechamiento, el almidón, constituido por solo moléculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre, especialmente en la población de bajos recursos. En el anexo, se muestran las estructuras de los principales mono, di y polisacáridos. 1.1 1.1.1 Fundamentos químicos de las pruebas. Prueba de Molish

Es una reacción general para carbohidratos quecontienen más de 5 átomos de carbono, la reacción se muestra en la siguiente figura: Figura 1 Reacción de Molish

O

OH OH OH OH OH

CH CH CH CH CH CH2 Hexosa

H2SO4 3H2O

O HOH3C H Hidroximetil Furfura O C

OH

O HOH3C O C H +

2
HO H3 C

OH

O

CH
OH

1.1.2

Prueba de Barfoed:

Es una reacción para identificar monosacáridos, aunque algunos disacáridos (losreductores) dan positiva la reacción, pero con mas tiempo de calentamiento, ya que así se hidroliza el disacárido. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a oxido cuproso. 1.1.3 Prueba de Bial o de Orcinol-HCl

Es una prueba específica para pentosas la cual se muestra en la figura 2. La positividad se reconoce por la formación de una coloración verde botella brillante. 48

Figura 2Reacción de Bial

O

OH OH OH OH

CH CH CH CH CH2 Pentosa

HCl 3H2O

O O Furfural CH

OH

CH3

CH 3 OH

O O CH +

2
HO OH

H2O

O
CH 3

CH
OH

Orcinol

OH bis (3,5 - dioxi-metil-fenil furfuril-metano)

1.1.4

Prueba de Seliwanoff:

Es especifica para cetosas que contengan 5 o más átomos de carbono, pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa. Lareacción se presenta en la figura 3 Figura 3 Reacción de Seliwanoff

OH

O

OH HC l 3H 2 O O C

O H C H2O H Hidroximetil-furfural

C H 2 C C HC HC HC H 2 O H OH Fructuosa
1.1.5 Prueba de Lugol:

Es una prueba que se usa para identificar almidón. El color azul, se debe, posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón. 1.1.6 Prueba de Benedict: Es una prueba específica...