Biologia

Northern blot (Inmunotransferencia Northern)
Es una técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una secuencia de ARN específica en una muestra de sangre o de tejido. Las moléculas de ARN enuna muestra se separan por tamaño mediante electroforesis en gel. Los fragmentos de ARN son transferidas del gel a la superficie de una membrana. La membrana se expone a una sonda de ADN marcada conuna etiqueta radiactiva o química. Si la sonda se une a la membrana, entonces la secuencia complementaria de ARN está presente en la muestra.
Procedimiento
El procedimiento general comienza con laextracción del RNA total de una muestra de tejido homogenizado.
Las muestras de ARN son entonces separadas por electroforesis en gel.
Dada la fragilidad de los geles y la incapacidad de las sondaspara penetrar en la matriz, las muestras de RNA, separadas por tamaño tras la electroforesis, serán transferidas a una membrana de Nailon por medio de capilaridad o un sistema de transferencia alvacío.
Los sistemas de capilaridad iónica se utilizan para transferir el ARN desde un gel de electroforesis a una membrana de Northern blot.
Después del marcaje de la sonda, ésta se hibrida con el RNAen la membrana.
Finalmente, la membrana debe de lavarse para asegurar que la sonda se ha unido de forma específica y para evitar ruido de fondo en las señales emitidas por la misma.
AplicacionesEl northern Blot permite observar un patrón particular de expresión genética entre tejidos, órganos, estadios del desarrollo, niveles de estrés ambiental, infecciones causadas por patógenos y duranteel curso del tratamiento de las mismas.
Esta técnica se ha utilizado para mostrar la sobreexpresión de oncogenes y la desregulación de genes supresores tumorales en células cancerosas cuando soncomparadas con tejidos normales.
Los patrones de expresión obtenidos nos ayudan a conocer las funciones de los genes. Desde que el RNA se separó por su tamaño, las sondas contra el mismo pueden darnos...