biologia

TCNICAS DE TINCIN Objetivo El alumno aprender y aplicar las tcnicas bsicas de tincin ms frecuentes. Generalidades La coloracin es el proceso de teir artificialmente los microorganismos con colorantes o reactivos para facilitar su estudio microscpico forma, agrupacin y estructuras) Un colorante es un compuesto orgnico que consta de anillos bencnicos y grupos cromforos ( agrupacin de tomos queda color a ciertos compuestos) y auxocromos ( sustituyentes como el grupo oxidrilo o el amino que mejoran las caractersticas de absorcin del cromforo) En el laboratorio de microbiologa se pueden usar los colorantes de varias formas como Para teir bacterias y hacerlas visibles al microscopio Para mostrar estructuras del organismo estudiado. Para la identificacin de microorganismos en base a suscaractersticas de tincin, por ejemplo, si son o no alcohol-cido resistentes, si son Gram positivas o Gram negativas. En los medios de cultivo para inhibir el desarrollo de algunas bacterias y as poder estudiar selectivamente a los microorganismos que si crecen. TINCIN DE BACTERIAS La clula bacteriana intacta se tie fcilmente con colorantes bsicos como el cristal, azul de metileno y fucsina bsica,pero relativamente mal con colorantes cidos como la eosina. Un colorante bsico es aquel constituido por un agrupamiento de tomos orgnicos con carga positiva que ser la parte activa del colorante ya que tendr afinidad por los cidos nucleicos. Un colorante cido es aquel que se encuentra constituido por tomos orgnicos con carga neta negativa por lo cual tiene afinidad por el citoplasma. TIPOS DETINCIN Tincin simple. Conocida con ese nombre ya que solo nos sirve para hacer ms fcilmente visibles a las bacterias sin resaltar ninguna caracterstica en especial. Una tincin simple se lleva a cabo cubriendo con colorante bsico un frotis seco y fijado al calor. El frotis se deja reaccionar con las clulas por un minuto y se lava suavemente con agua. El frotis se puede dejar secar o usar papel secantepara que quede listo para observarse. Tincin negativa. Este mtodo de tincin utiliza colorantes neutros o cidos ya que tienen poca afinidad por la clula bacteriana por lo tanto como no se absorben se colorea el fondo en el que estn las bacterias pero la clula queda incolora y transparente, as pues las bacterias aparecen como pequeas reas iluminadas en un fondo oscuro. La tincin acdica connigrosina, o neutral ( con tinta china) son las ms usadas. Tincin diferencial. Las bacterias se diferencian unas de otras tanto fsica como qumicamente, por lo cual su reaccin ante algunos colorantes tambin ser diferente dando lugar as a grupos tintoreales caractersticos. Entre estos grupos estn los que se originan por la tincin descubierta por Hans Christian Gram, esta tincin divide a las bacterias enGram positivas o Gram negativas lo cual no solo sirve para diferenciarlas sino an para elegir la terapia adecuada en algunos casos. Existen otras tinciones diferenciales de utilidad en microbiologa clnica como la de Ziehl- Neelsen. Tincin estructural. Existen diferentes tipos de colorantes que de acuerdo a su afinidad se utilizan para teir y detectar ciertas estructuras de la clula bacteriana comoson las esporas, los flagelos y las cpsulas. TINCIN SIMPLE MATERIAL 2 portaobjetos Asa bacteriolgica Aceite de inmersin Microscopio Mechero Azul de metileno de Leffler Cepa de Escherichia coli TCNICA Preparar un frotis de E. coli de acuerdo a las indicaciones de la figura 1 y fijarlo al calor. Cubrir el frotis con azul de metileno y dejar en reposo por un minuto. Lavar con agua corrientesuavemente y dejar secar. Observar con el objetivo de inmersin. TINCIN NEGATIVA MATERIAL Y EQUIPO 4 portaobjetos Asa bacteriolgica Aceite de inmersin Microscopio Vaso de precipitado de 200 ml con fenol al 5 Nigrosina o tinta china Puente de tincin Cepa de Klebsiella pneumoniae TCNICA Hacer una suspensin ligera en solucin salina de K. pneumoniae y mezclar una gota de esta suspensin con una pequea gota...