Biomedicina

1. El sitio de reconocimiento de la enzima de restricción SauIIIA es GATC. El sito de reconocimiento de la enzima BamHI es GGATCC, en el que las cuatro bases internas son idénticas al sitio de SauIIIA; esto significa que los extremos de cadena sencilla producidos por ambas enzimas son idénticos. Suponga que tiene un vector de clonación que contiene un sitio BamHI y un DNA exógeno (inserto) que hacortado con SauIIIA. ¿Puede ligarse este DNA en el sitio BamHI del vector?

R=si, si se puede.
¿Por qué?
R=si bien el corte de las enzimas produce una cadena sencilla idéntica, generan extremos cohesivos. La forma en que cortan las enzimas respectivamente (de acuerdo a www.neb.com) es:
BamHI.- G/GATCC G/GATC
C CTAG/G C CTAG

SauIIIA.- /GATC
CTAG/
Ahora bien, nos podemos dar cuentaque las bases de uno y otro corte son las complementarias para ambos, entonces si las sobreponemos, debería de poder darse la recombinación. Posiblemente se tenga que usar una enzima ligasa.

2. En experimentos de DNA recombinante, ¿Cuál es la función de cada uno de los siguientes elementos?; endonucleasa de restricción, plásmido, cloruro de calcio, célula huésped.

R= Endonucleasa derestricción su función es reconocer nucleótidos en un ADN y romper DNA mediante estas secuencias específicas (de 4 a 8 bases) de nucleótidos, esta ruptura es a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiester. Generan extremos cohesivos (Esto quiere decir que un extremo que generó una enzima y otro que generó la misma enzima aunque provengan de moléculas de ADN diferentes, se pueden unir y generar lo quese llamó inicialmente un ADN recombinante.) (con monocadenas) o extremos romos. En general existen tres tipos de endonucleasas de restricción.
Plásmido.-
Los plásmidos son moléculas de ADN circulares, pequeñas, que se encuentran en las bacterias por fuera del ADN cromosómico. Dado que se adaptan a albergar otro pedazo de ADN, se abre la posibilidad de poner un gen determinado (o un tramo de ADNdeterminado) en un plásmido circular, generando un ADN recombinante. En estas circunstancias el plásmido está funcionando como un “vector”: es capaz de llevar el trozo de ADN (que denominamos inserto) y mantenerlo o tenerlo aislado, lo cual era uno de los propósitos de la manipulación genética.
El plásmido, que naturalmente está en las bacterias, puede volver a las bacterias y crecer con ellas.Se pueden transformar bacterias con plásmidos que llevan inserto. Una vez dentro de la bacteria, el plásmido se replica con ella. Así se consigue que el trozo de ADN además de estar aislado, sea amplificado y se obtienen rápidamente muchas copias idénticas. Decimos que el trozo de ADN fue clonado. Teniendo una cantidad mayor de ADN del tramo de interés éste puede ser secuenciado, cortado conenzimas de restricción u otras manipulaciones.

Cloruro de calcio.-Permite la entrada del plásmido. En el caso de E. coli las células se deben embeberlas con cloruro de calcio para hacerlas competentes y así poder combinarse con el DNA clonado y se someten a un choque térmico leve.
Aparentemente el agregado con calcio protege al DNA de la degradación por las nucleasas celulares. El tamaño y lacalidad del precipitado es crítico para el éxito del proceso, que se ve afectado por factores tales como pequeños cambios en el pH de la solución
Célula huésped.-Sirve como una copiadora biológica, realizando muchas copias de la molécula recombinante, mediante el plásmido.

3. Un plásmido resistente a ampicilina y a tetraciclina se corta con EcoRI, que corta dentro de la secuencia de resistencia aampicilina. El plásmido cortado se liga con DNA de células de mosca Drosophila digerido con EcoRI. La mezcla se usa para transformar bacterias competentes.
a. ¿Qué antibiótico debe añadirse al medio para seleccionar las células que incorporaron el plásmido?

R= El antibiótico que se debe añadir al cultivo es Tetraciclina, así se eliminaran a todas las células que no hayan obtenido el...