bioquimica cuantificacion de glucogeno



PRACTICA N 8: OBTENCION Y CUANTIFICACION DE GLUCÓGENO EN HÍGADO

INTRODUCCIÓN


El glucógeno es un polisacárido formado por cadenas de glucosa con uniones alfa 1,4 y alfa 1,6. Las uniones alfa 1.6 son las que permiten la ramificación del glucógeno. Constituye una forma de almacenamiento de glucosa rápida movilización y es fundamental para el musculo esquelético., el cual obtiene suenergía a partir de glucosa durante el ejercicio. Durante el reposo, el principal combustible del musculo esta constituido por acidos grasos.
El hígado es el órgano encargado de regular niveles de glucosa durante el ayuno y los periodos post-prandiales, encargándose de almacenar glucosa como glucógeno o de degradar este cuando la glicemia desciende por debajo de los niveles normales. El hígado adiferencia de otros órganos, no usa glucosa como combustible para su funcionamiento , sino principalmente ceto-acidos derivados de la degradación de aminoácidos.













II.-OBJETIVOS
-Extraer el glucógeno a partir de hígado de rata
-Cuantificar el glucógeno obtenido
-Calcular el rendimiento de la purificación del método
III.- MARCO TEÓRICO
El glucógeno, es un polisacárido dereserva energética formado por cadenas ramificadas de glucosa; es insoluble en agua, en la que forma dispersiones coloidales. Abunda en el hígado y en menor cantidad en los músculos, así como también en varios tejidos.
Una sola molécula de glucógeno puede contener más de 120.000 moléculas de glucosa.
La importancia de que el glucógeno sea una molécula tan ramificada es debido a que:
1. Laramificación aumenta su solubilidad.
2. La ramificación permite la abundancia de residuos de glucosa no reductores que van a ser los lugares de unión de las enzimas glucógeno fosforilasa y glucógeno sintetasa, es decir, las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de síntesis como la de degradación del glucógeno.
El glucógeno es el polisacárido de reserva energética en los animales que sealmacena en el hígado (10% de la masa hepática) y en los músculos (1% de la masa muscular) de los vertebrados. Además, pueden encontrarse pequeñas cantidades de glucógeno en ciertas células gliales del cerebro.
Gracias a la capacidad de almacenamiento de glucógeno, se reducen al máximo los cambios de presión osmótica que la glucosa libre podría ocasionar tanto en el interior de la célula como en elmedio extracelular.
Cuando el organismo o la célula requieren de un aporte energético de emergencia, como en los casos de tensión o alerta, el glucógeno se degrada nuevamente a glucosa, que queda disponible para el metabolismo energético.
En el hígado la conversión de glucosa almacenada en forma de glucógeno a glucosa libre en sangre, está regulada por la hormona glucagón y adrenalina. El glucógenohepático es la principal fuente de glucosa sanguínea, sobre todo entre comidas. El glucógeno contenido en los músculos es para abastecer de energía el proceso de contracción muscular.
El glucógeno se almacena dentro de vacuolas en el citoplasma de las células que lo utilizan para la glucólisis. Estas vacuolas contienen las enzimas necesarias para la hidrólisisde glucógeno a glucosa.
El análisisdel glucógeno presente en un órgano requiere su previo aislamiento, de modo de eliminar otras moléculas que pueden interferir en su determinación. Las proteínas y ácidos nucleicos precipitan cuando el homogenizado del tejido es sometido a la acción de un agente desnaturalizante como el ácido tricloroacético (TCA), lo que permite su rápida separación. El glucógeno que se encuentra en la soluciónremanente precipita en contacto con etanol, con lo cual se completa su purificación. Para su cuantificación se recurre al método colorimétrico, basado en la condensación de la antrona con derivados del furfural que se forman, cuando los glúcidos (y entre ellos también los polisacáridos sin hidrólisis previa) son calentados en soluciones ácidas.
IV.- PROCEDIMIENTO
A:Sacrificio del animal y toma...