Bioquimica

Laboratorio Nº 6
Cinética Enzimática II: Determinación de Parámetros Cinéticos Km y Vmáx
1. INTRODUCCION
La función de las enzimas es catalizar reacciones. La cinética enzimática es la rama
de laenzimología que estudia los factores que afectan la velocidad de las
reacciones enzimáticas.
Los factores más importantes son: concentración de enzima, concentración de
ligandos, (sustratos,productos, inhibidores y actividores) pH, fuerza iónica y
temperatura. Cuando estos factores son analizados apropiadamente, es posible
aprender acerca de la naturaleza de las enzimas. Por ejemplo,variando la
concentración de sustrato(s) y de producto(s) es posible deducir el mecanismo
cinético de la reacción, esto es, el orden según el cual se unen los sustratos y los
productos se disocian de laenzima. Estos estudios establecen los tipos de
complejos E S y E P que pueden formarse y por lo tanto, nos hablan acerca de la
arquitectura del centro activo. En algunos casos la cinética de lareacción da
evidencia de intermediarios covalentes estables, indetectables por análisis químicos
comunes.
Un análisis cinético puede llevar a un modelo de una reacción catalizada, y al
mismo tiempo,los principios de cinética enzimática pueden utilizarse para escribir
la ecuación cinética para un modelo atractivo. La ecuación cinética indica como
interaccionan todos los ligandos del sistema alafectar la velocidad de la reacción.
Una vez que se tiene una ecuación posible, el modelo debe ser probado
experimentalmente.
Los principios de cinética enzimática permiten diseñar experimentos eindicar, si se
está trabajando con una sola enzima, o si la preparación contiene múltiples
enzimas que catalizan la misma reacción. Por otra parte informan si la preparación
enzimática contieneinhibidores o activadores. Comparando las constantes
cinéticas de aparentes enzimas idénticas de tejidos diferentes, o del mismo tejido
en diferentes etapas de desarrollo, es posible decidir si las dos...