bioquimica

Universidad Nacional de Trujillo
FACULTAD DE INGENIERIA QUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE ING. AMBIENTAL

CURSO

: Bioquímica experimental

DOCENTE

: Salazar Castillo, Marco

ALUMNO

: Guevara Neyra, Jhonny

CICLO

:
VI

TRUJILLO-PERÚ
2013

Ejercicio 02.
La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilinasa (también conocida
como β – lactamasa), un enzima presente enalgunas bacterias resistentes. La masa de este
enzima en staphylococus aureus es de 29.6 Kd. La cantidad de penicilina hidrolizada en
un minuto en una disolución de 10 mL que contiene 109 g de penicilinasa purificada se
midió como función de la concentración de penicilina. Supóngase que la concentración
de penicilina no cambia apreciablemente durante el ensayo.
(a) Hágase la representación de 1/Vfrente a 1/[S] a partir de los datos de la tabla.
¿Parece obedecer la penicilina la cinética de Michaelis - Menten? Si es así cual es
el valor de Km?
(b) ¿Cuál es el valor de Vmax?
(c) ¿Cuál es el número de recambio? De la penicilinasa baja estas condiciones
experimentales. Hay que suponer un centro activo por molécula del enzima.

[Penicilina]

Cantidad hidrolizada
(nMoles/min)

1000 nM
3000 nM
5000nM
10000 nM
30000 nM
50000 nM

0.11
0.25
0.34
0.45
0.58
0.61

La penicilina (β – lactamasa) hidroliza la penicilina. Compárese a la penicilina con la
glicopeptido transpeptidasa.

Resolución:
(a) Hágase la representación de 1/V frente a 1/[S] a partir de los datos de la tabla.
¿Parece obedecer la penicilina la cinética de Michaelis - Menten? Si es así
cual es el valor de Km?

Graficamos Vo contra[S] y obtenemos la siguiente grafica

Grafico Nº 01. Vo vs [S]
0.7
0.6

Vo

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

[S]

La curva obtenida al graficar V vs [s] tiene una trayectoria hiperbólica, la cual a
bajas concentraciones de sustrato se encuentra siempre una enzima “libre” que
transforma casi cualquier molécula de sustrato que entre en centro activo; la
velocidadde transformación aumenta inicialmente de forma lineal a medida que
aumenta la concentración de sustrato. Por lo que la curva obtenida obedece la
cinética de Michaelis – Menten.
Para calcular el valor de Km la ecuación de Michaelis se transforma en una
función lineal, con lo que obtenemos la representación de Lineweaber – Burk (o
de dobles inversos).
Con lo que se obtiene la siguiente gráfica:Grafico Nº 02. 1/Vo Vs 1/[S]
10
9
8

1/Vo

7
6
5
4
3
2
1
0
-0.0004 -0.0002

0

0.0002

0.0004

1/[S]

0.0006

0.0008

0.001

0.0012

Calculamos Km:
−

1
= −0.00018 → 𝐾𝑚 = 5555.56 𝑛𝑀
𝐾𝑚

(b) ¿Cuál es el valor de Vmax?
1
= 1.5 → 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 0.67 𝑛𝑀/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚𝑎𝑥
(c) ¿Cuál es el número de recambio? De la penicilinasa bajo estas condiciones
experimentales? Hay que suponer un centro activo por molecula delenzima.

Calculamos la concentración de la enzima.
29.6 𝐾𝑑 = 29.6 𝐾𝑔/𝑚𝑜𝑙

𝑁𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 =

[𝐸]𝑡 =

𝐾𝑐𝑎𝑡 =

10−12 𝑘𝑔
= 3.38 × 10−14 𝑚𝑜𝑙
29.6 𝐾𝑔/𝑚𝑜𝑙

3.38 × 10−14 𝑚𝑜𝑙
= 3.38 × 10−3 n𝑀
10−2 𝐿

𝑉𝑚𝑎𝑥
0.67n𝑀/𝑚𝑖𝑛
=
= 198.22 𝑚𝑖𝑛−1 = 3.30 𝑆𝑒𝑔−1
[𝐸]𝑡
3.38 × 10−3 n𝑀

Ejercicio 03.
La penicilina Enzima elaborada por ciertas bacterias, entre ellas numerosas cepas de
estafilococos, que inactiva lapenicilina, favoreciendo así la resistencia al antibiótico y la
glicopéptido transpeptidasa es una enzima que cataliza la reacción de entrecruzamiento
entre aminoácidos de glicina y la alanina implicada en la síntesis de la pared celular
bacteriana.

Ejercicio 04.
Se mide la cinética de un enzima como función de la concentración de sustrato en
presencia y ausencia del inhibidor (I), 2×10-3 M.
(a)(b)
(c)
(d)

¿Cuáles son los valores de Vmax y KM en ausencia de inhibidor? ¿y en su presencia?
¿De qué tipo de inhibición se trata?
¿Cuál es la contante de unión este inhibidor?
Cuando [S] = 1×10-4 M y [I] = 2×10-3 M, ¿Qué fracción de las moléculas están
ligadas al sustrato y al inhibidor?
(e) Cuando [S] = 1×10-5 M, ¿Qué fracción de moléculas del enzima tienen ligadas
moléculas de sustrato en...