Biotecnólogo

Reacción de Hill

Los trabajos de Hill y Scarisbrick realizados entre 1930 y 1940 demostraron que cloroplastos aislados, y fragmentos de éstos, son capaces de liberar O2 en presencia de luz si seles proporciona un aceptor conveniente para los electrones que se extraen del agua. Los primeros aceptores de electrones utilizados fueron sales férricas (Fe3+), que se reducen a forma ferrosa(Fe2+). La ruptura del agua inducida por la luz (fotolisis), en ausencia de fijación de CO2, pasó a ser conocida como reacción de Hill. Los trabajos de Hill demostraron que, al menos para algunasreacciones de la fotosíntesis, no se necesita de toda la célula, y que la liberación de O2 inducida por la luz no se encuentra indefectiblemente unida a la reducción del CO2.

Objetivo

El objetivo deesta práctica es realizar un proceso de fraccionamiento celular que permita el aislamiento de cloroplastos y con los cloroplastos aislados, poner de manifiesto la reacción de Hill.

Material

-Hojas de espinaca
- Mortero y mazo
- Arena lavada
- Cubeta con hielo picado
- Embudo y gasa para filtrado
- Pipetas graduadas de 10 y 1 ml
- Gradilla con 4 tubos de ensayo y 2 de centrífuga
-Matraz erlenmeyer y vaso de precipitado de 100 ml
- Probeta de 50 ml
- Papel de aluminio para cubrir los tubos de ensayo
- Lámpara de 100 W
- Centrífuga
- Espectrofotómetro
- Agua destilada
-100 ml de tampón fosfato 0,1 M pH 6,2
- 10 ml de cloruro potásico 0.5 M
- 5 ml de 2,6 diclorofenol-indolfenol (DCIP) 1,7x10-3 M

Método

Aislamiento de cloroplastos

* Tomar 5 g de hojasde espinaca, evitando los nervios, y trocearlos.
* Colocar el mortero sobre un lecho de hielo picado y triturar suavemente el tejido, durante 2 o 3 minutos, utilizando una pequeña cantidad dearena como abrasivo y añadiendo lentamente 15 de tampón fosfato.
* Filtrar el extracto obtenido con una doble capa de gasa para eliminar la arena y pasar el filtrado a un tubo de centrífuga.
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