Biotecnologia

TECNICAS DE MANIPULACIÓN DEL ADN

La ingeniería genética consiste en la alteración artificial del genoma de un ser vivo modificando su ADN. Para ello es preciso aplicar una serie de métodos y técnicas reciben el nombre de tecnología del ADN recombinante.
Estas técnicas son:
-SECUENCIACIÓN DEL ADN:

Cuando se conoce la secuencia de bases de ungen se pueden identificar las regiones codificadoras de proteínas , y las regiones que corresponden a secuencias reguladoras de la expresión del gen. Conociendo la secuencia codificadora del gen se puede deducir la secuencia de aminoácidos de la proteína codificadora.

-FORMACIÓN DE MOLÉCULAS DE ADN RECOMBINANTE:
La formación de moléculas de ADN recombinante se realizaen tres etapas:

1) CORTE DE FRAGMENTOS DE ADN: Las endonucleasas de restricción son unas enzimas bacterianas que presentan la propiedad de cortar el ADN solo en determinadas secuencias de nucleótidos. Estas enzimas cortan las dos cadenas de ADN en unos lugares específicos dentro de la secuencia diana.
2) SEPARACIÓN DE LOS FRAGMENTOS DE ADN: Cuando se ha cortado unamolécula de ADN se originan fragmentos de diferentes tamaños los cuales se separan mediante la electroforesis en gel debido a que al aplicar un campo eléctrico a los distintos fragmentos de ADN estos de desplazan por el gel en función de su tamaño. Los mas pequeños migran más en el gel que los mas grandes originando diferentes bandas dependiendo de su tamaño.
3) UNIÓN AL VECTOR: Tras separar losfragmentos de ADN, hay que unirlos a otras moléculas de ADN transportadoras denominada vectores. La unión se hace mediante la enzima ADN ligasa, que forma una unión covalente entre ambos fragmentos.

Las moléculas de ADN que resultan de la unión de un gen elegido y un vector adecuado para su transporte recibe el nombre de ADN recombinante.

-SÍNTESIS DE ADN COMPLEMENTARIO:Se denomina ADNc o cpmlementario a una secuencia de ADN sintetizada de forma artificial utilizando como molde el ARN mensajero mediante la enzima transcriptasa inversa.
La ventaja de este tipo de moléculas es que al no contener intrones todas las secuencias son codificantes ya que tampoco hay regiones reguladoras ni regiones con repetición.-SINTESIS DE ADN DE NOVO, OBTENCIÓN DE ADN SINTÉTICO:

Consiste en la obtención de oligonucleótidos de ADN cuya secuencia se conoce lo que resulta muy útil para prepara fragmentos de ADN en diversas técnicas moleculares. Esta sintesis de ADN se hace mediante un proceso escalonado en el que se va añadiendo nucleótidos al extremo de la cadena en crecimiento. Este proceso se realizaautomáticamente mediante máquinas sintetizadoras de ADN. Si se conoce la secuencia de aminoácidos de una proteína o parte de ella se puede sintetizar el ADN del gen correspondiente.

-HIBRIDACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS:

Para realizar varias copias de un gen es preciso saber en que cromosoma o en que región del cromosoma se localiza, y saber en que tipo de célula seexpresa dicho gen, para ello se emplea las técnicas de hibridación basadas en la capacidad de apareamiento entre cadenas de ácidos nucléicos con secuencias complementarias, cuanto mayor hibridación se produzca entre dos hebras habrá mayor semejanza de sus secuencias.
Para realizar la hibridación se necesita una sonda, que es una molécula de ácido nucleico monocatenario(una hebra de ADN o unamolécula de ARN) que sirve para buscar secuencias complementarias.
Se pueden llevar a cabo dos tipos de hibridación:
-Hibridacion ADN-ADN: Cuando la sonda es un fragmento de ADN monocatenario de secuencia conocida, para ello se emplea la transferencia de tipo Southern.
-Hibridación ADN-ARN: Cuando la sonda es una molécula de ARN, que puede ser un ARNm, en la cual se emplea la transferencia de...