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EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS

MÉTODO DEL DMSO (Dimetilsulfóxido)

Para la cuantificación de los diferentes pigmentos se utilizan discos de hojas previamente congeladas ennitrógeno líquido y almacenadas a -80ºC.
Los pigmentos se extraen a partir de un disco de 0,5-0,8 cm de diámetro. Dicho disco se introduce en un tubo de ensayo con 1 ml de DMSO, y debe permanecer 2horas a 80ºC.
Transcurrido este tiempo el DMSO ha extraído por completo los pigmentos del tejido y se vierte el sobrenadante, desechándose el precipitado, en la cubeta de medida del espectrofotómetro.Posteriormente se mide la absorbancia a 750, 665, 649 y 480 nm, empleándose como blanco el DMSO. Para medir la turbidez del extracto se mira la absorbancia a 750 nm, ya que las clorofilas no absorbenen esa longitud de onda. Se miden las absorbancias a 665 y 649 nm, máximos de absorción para la clorofila a y la clorofila b respectivamente, en el caso de utilizar como disolvente el DMSO.Igualmente el contenido de carotenos y xantofilas (carotenoides) se cuantifica a 480 nm.
La concentración de clorofilas se calcula mediante las siguientes fórmulas, teniendo en cuenta que el disolventeempleado es DMSO:

Chla (µg / ml) = 12,47 x A665 – 3,62 x A649
Chlb (µg / ml) = 25,06 x A649 – 6,50 x A665

1000 x A480 – 1,29 Chla – 53,78 Chlb
Cx+c (Carotenoides) (µg / ml) =----------------------------------------------------
220
x + c = xantofilas + carotenos

Referencias bibliográficas: Barnes, J.D., Balaguer L., E. Manrique (1992) Dymethyl-sulfoxide according to Barneset al.


MÉTODO DE LA ACETONA (80%)

Para la cuantificación de los diferentes pigmentos se utilizan discos de hojas previamente congeladas en nitrógeno líquido y almacenadas a -80ºC.
Los pigmentos seextraen a partir de 0,1 g de peso fresco y se homogeneizan en 10 ml de acetona al 80% durante 2 minutos en oscuridad. Con el fin de eliminar los restos de material vegetal, el homogeneizado se...