Clonacion celular

La técnica del ADN recombinante se utiliza en estudios sobre la regulación de la expresión génica, en la regulación de la producción comercial de síntesis de proteínas como la Insulina o la hormonadel crecimiento, en el desarrollo de organismos transgénicos y en la amplificación del ADN, es decir, en obtener un gran número de copias de un gen determinado. En este último caso, existe una técnicamejor, denominada con las siglas PCR. |
2. Preparación de un vector de clonaciónEl vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Un vector debe presentar las siguientescaracterísticas: * Una pequeña secuencia de ADN fácil de aislar, como, por ejemplo, un plásmido. * Contener distintos puntos de ataque a enzimas de restricción y que sean conocidos. * Poder serincluido en la célula anfitriona con facilidad. * Replicarse de forma independiente al ADN de la célula anfitriona. * Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionar las célulasclonadas. Un ejemplo de marcador puede ser la resistencia a un antibiótico. |
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  3. Formación del ADN recombinanteEn esta etapa se produce la unión covalente del vector y el ADN insertomediante una ligasa. Así se realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick.  4. Introducción del ADN recombinante en la célula anfitrionaPara la clonación (replicación del ADN recombinante) senecesita la maquinaria celular. Por ello, hay que introducir el ADN recombinante en una célula anfitriona.Los tipos de células anfitrionas son: * Células bacterianas: son las más utilizadas, ya quetienen una alta velocidad de replicación, un bajo coste de mantenimiento de las colonias y son fácilmente manipulables. * Células eucariotas: aunque las células eucariotas son, en general, difícilesde mantener se usan levaduras y células tumorales: * Levaduras: se utilizan en procesos relacionados con la investigación de la expresión y la regulación génica y la síntesis de proteínas...