Colesterol HDL

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE
SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II
ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRÁCTICA – FEBRERO/2015HDL COLESTEROL


1. OBJETIVO: Determinar la concentración de HDL Colesterol en sangre precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL)determinando HDL colesterol en el sobrenadante con reacción de punto final.

2. DEFINICIONES:
HDL colesterol: Es una de las lipoproteínas más ricas en colesterol que contrarresta la acción nociva que puedatener la LDL, sobre nuestro organismo al evitar la arterioesclerosis excesiva.

3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: El acido fosfotungstico y el cloruro de magnesio, que precipitandoselectiva y cuantitativamente las VLDL y LDL, permiten la obtención de resultados comparables al método de referencia. Después de la centrifugación, el colesterol HDL se determina en el sobrenadanteutilizando el sistema enzimático colorimétrico colesterol medir la reacción de punto a 505 nm.
3.2. Muestra: Suero
3.2.1. Cantidad: 250 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco

3.3.Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotómetro (Stat Fax)
Baño maría a 37ºC
Vortex
3.3.2. Materiales:
Micropipetas :100 a 1000 ul
Tubos de hemolisis (tubos de Statfax)
Reloj marcador
3.3.3. Reactivos:
Standard
Reactivo precipitante
Reactivo de Colesterol (reactivo de trabajo)

3.4. Procedimiento:
3.4.1. Precipitación de las VLDL y LDL:
Enumerar los tubos,Añadir 250 ul de suero + 250 ul de reactivo Precipitante.
Agitar vigorosamente por 30 segundos fundamental para la obtención de resultados consistentes.
Centrifugar a 3500 rpm por lo menos 15 min. paraobtener un sobrenadante límpido
Pipetear el sobrenadante inmediatamente después del centrifugación teniendo cuidado de no resuspender el precipitado para evitar resultados falsamente elevados....