Coloracion De Bacterias

1. INTRODUCCIÓN

Dado que los microorganismos son invisibles al ojo humano debido a sus tamaños celulares y el alto contenido del agua, los biólogos han desarrollado métodos de tinción de las células para facilitar su observación al microscopio. Existen una gran cantidad de colorantes aplicados en la microbiología, así como diversas técnicas de tinción, dependiendo del tipo de microorganismoque desea ser estudiados y los propósitos particulares de cada estudio.

Esta práctica pretende introducir al estudiante a las técnicas y colorantes frecuentemente empleadas en la microbiología básica. Para observar las características de las bacterias en el microscopio es necesario hacer preparaciones (extendidos o frotis) sobre una lámina portaobjetos, que posteriormente deben ser teñidas parapoder observarlas al microscopio.

2. OBJETIVOS

Aprender las técnicas del montaje de placas con bacterias y empezar a familiarizarse con el manejo de los cultivos.

3. CONSULTAS PRELIMINARES

El estudiante deberá consultar sobre los colorantes empleados frecuentemente en biología y microbiología: naturaleza, clasificación, restricciones, riesgos y disposición de este tipo de compuestos.4. MATERIALES

MATERIAL | CANTIDAD |
Laminas portaobjetos | 4 |
Asa bacteriológica | 1 |
Mechero | 1 |
Goteros | 1 |
Toallas de papel | 2 |
Bandeja de coloración | 1 |
Cultivos bacterianos | 1 |

5. REACTIVOS

Para el desarrollo de la presente práctica se emplearán diferentes colorantes y agentes decolorantes, los cuales serán suministrados por el técnico de laboratorio.Estos reactivos se entregan ya preparados según las indicaciones de tinción de cada procedimiento.

SUSTANCIAS* | CANTIDAD |
Azul de metileno | 50 ml |
Cristal violeta | 50 ml |
Fucsina fenicada | 50 ml |
Lugol de Gram | 50 ml |
Decolorante alcohol – acetona | 50 ml |
Sulfato de cobre 20% | 50 ml |
Verde malaquita 5% | 50 ml |
Safranina 0,5% | 50 ml |
Tinta china(nigrosina) | 50 ml |
Aceite de inmersión | 10 ml |

Los colorantes, además de su propiedad de teñir los materiales y ropas, deben manipularse con cuidado, pues tienen propiedades tóxicas, ya sea por ingestión o exposición a través de la piel.

6. EQUIPOS

EQUIPOS* | CANTIDAD |
Microscopio | 10 |

7. PROCEDIMIENTO

7.1 PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO O FROTIS BACTERIANO:

7.1.1. A partir demedios líquidos (caldos de cultivo, saliva, leche, etc.).

* Lave bien el portaobjetos y séquelo. Elimine toda suciedad y especialmente la grasa. Manéjelo tomándolo por los bordes.
* Esterilice el asa poniéndola verticalmente a la llama del mechero hasta que se ponga al rojo en toda su longitud. Déjela enfriar al menos 5 segundos.
* Destape el tubo de cultivo y flamee el cuello delmismo. Evite colocar la tapa sobre la mesa.
* Tome con el asa una (o dos) muestra (s) de cultivo. Evite tocar las paredes del tubo de cultivo con el asa.
* Flamee nuevamente el cuello del tubo de cultivo y tápelo
* Coloque la suspensión de bacterias en el centro del portaobjetos. Extienda la suspensión
* Flamee el asa al rojo vivo.
* Deje secar el extendido por evaporaciónnormal del agua. No aplique calor
* Una vez seco, flamee varias veces el extendido a la llama del mechero, así las bacterias quedan firmemente adheridas al portaobjetos

7.1.2. A partir de medios sólidos (agares)

* Coloque con el asa una gota de agua en el centro del círculo del portaobjetos.
* Esterilice el asa y enfríela introduciéndola en el borde del medio de cultivo
* Con elasa saque una pequeña porción de colonia bacteriana evite siempre tomar medio de cultivo.
* Coloque la muestra sobre la gota de agua del portaobjetos, haga una extensión delgada. Si usted observa que la suspensión no se extiende en la superficie del porta objetos, sino que se recoge en gotas, significa que el porta objetos está engrasado y deberá repetir el proceso en un porta objetos...