coloración gram



LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

TINCIÓN Y OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

Nombre:

JORGE LUIS CHAVEZ.


Experiencia curricular:

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL.


Nombre de la docente:

BLGA. MARITZA ZAVALETA DIAZ.


Escuela profesional:

ING. AMBIENTAL.















1. OBJETIVO.

Brindar al estudiante herramientas básicas en la confección y el manejo deextendidos y la tinción de los mismos de acuerdo a la observación que se desee realizar, siguiendo los pasos adecuadamente para el éxito del procedimiento.


2. MARCO TEORICO.

Tinción:

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación enmicroscopio óptico.
Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo.
De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de tinción:

a) Tinción simple: El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular.




b) Tincióndiferencial: El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan mas de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción.
Ejemplos: Tinción de Gram, Tinción de Ziehl-Neelsen, etc.

Colorantes:
Los colorantes más utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos y secombinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y los poli sacáridos ácidos (las envueltas externas de los microorganismos están por lo general cargadas negativamente).

Tinción diferencial de Gram:

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción deGram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativos (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicamente distintos de bacterias).
Las bacterias grampositivas y gramnegativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica.
El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula grampositiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano a sí como algo de ácido teicoico.
Generalmente, 80% - 90% de la pared de lacélula grampositiva es peptidoglicano.
La pared de la célula gramnegativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gramnegativa es peptidoglicano.



Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción deGram:
El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células.
EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para evitar que pierdan la tinción las células grampositivas.
Cultivos de más de 24 horas de teñidos pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta -yodo.


3. MATERIALES:

Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopio óptico
Solución de cristal violeta al 1 %
Solución de azul de metileno al 1 %
Solución de safranina al 1 %
Solución decolorante (alcohol etílico y acetona 1:1)
Solución de I2/ I (yodo / yoduro al 0.1 %)
Muestra bacteriológica de origen natural: Sarro dental, yogur, etc.
Asa de siembra o aguja enmangada.
Palillos...