COMO ABORDAR Y RESOLVER

COMO ABORDAR Y RESOLVER
ASPECTOS PRÁCTICOS DE
MICROBIOLOGÍA
1. DILUCIONES Y CONCENTRACIONES.
MUESTRAS LÍQUIDAS Y SÓLIDAS

Inés Arana, Maite Orruño e Isabel Barcina
Departamento Inmunología, Microbiología y Parasitología
Universidad del País Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea

1. DILUCIONES Y CONCENTRACIONES. MUESTRAS LÍQUIDAS Y
SÓLIDAS
Es un hecho que en la mayoría de los ambientes,la densidad microbiana suele ser
demasiado elevada o baja para poder realizar una siembra directa de la muestra que
de buenos resultados en la enumeración de microorganismos. Esta situación hace
necesaria la dilución o la concentración de la muestra previa a la realización de
cualquier estudio. Además, las muestras sólidas requieren su dilución para facilitar la
manipulación y permitirtrabajar con ellas como si fueran muestras líquidas.

En la mayoría de los casos, se trabaja con diluciones decimales. El caso más sencillo es la preparación
de 10 ml de la dilución 1/10 de la muestra. Para ello, se añade 1 ml de muestra a 9 ml de diluyente; es
decir de cada 10 ml de esta dilución 1/10, 1 ml corresponde a la muestra. Expresándolo mediante una
ecuación:
1 ml Muestra
10 ml dedilución 1/10 ó 10-1

Dilución 1/10 =
1 ml Muestra + 9 ml Diluyente

Se pueden preparar diluciones sucesivas. Por ejemplo, si se requiere la dilución 1/100, ó expresado de
otro modo la dilución 10-2, a partir de esta dilución 1/10, se elaboraría de acuerdo con la ecuación
siguiente:
1 ml Dilución 10-1
10 ml de dilución 1/100 ó 10-2

Dilución 1/100 =
-1

1 ml Dilución 10 + 9 ml DiluyenteO bien directamente,
1 ml Muestra
100 ml de dilución 1/100 ó 10-2

Dilución 1/100 =
1 ml Muestra + 99 ml Diluyente
0,1 ml Muestra

10 ml de dilución 1/100 ó 10-2

Dilución 1/100 =
0, 1 ml Muestra + 9,9 ml Diluyente

Nota: El volumen final obtenido viene dado por el denominador de la ecuación.

Con estas nociones, se deben proponer soluciones para los problemas siguientes:
1.1.¿Cómo se preparan 250 ml de la dilución 10-1 a partir de una muestra de agua?
1.2. Queremos preparar 10 ml de la dilución 10-5 en 3 únicos pasos, ¿cómo lo haría?

1.3. Se requiere la dilución 10-6 de una muestra de agua, pero se dispone únicamente de 3 tubos vacíos
estériles y de 30 ml de solución salina (diluyente) estériles ¿Cómo se prepararía esa dilución?
¿Y si tuviéramos 6 tubosEppendorff (volumen hasta 1 ml) pero únicamente 10 ml de solución
salina?
1.4. Se necesitan preparar 150 ml de dilución 10-1 de una muestra de agua. Realizar un esquema claro
y detallado de los pasos que se deben llevar a cabo, volúmenes transferidos, etc.
¿Y si se tuvieran que preparar 150 ml de dilución 10-3?
1.5. A partir de una muestra de agua, ¿cómo se elaboran las diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½?En el caso de muestras sólidas, se debe sustituir ml de muestra por g de muestra:
1 g Muestra
10 ml de dilución 1/10 ó 10-1

Dilución 1/10 =
1 g Muestra + 9 ml Diluyente

1.6. Se pesan 1,5 g de alimento, se añaden 13,5 ml de Solución Ringer (diluyente) y se homogeniza,
¿cuál es la dilución de trabajo?
1.7. Con el fin de determinar la densidad microbiana en un yogur, se requiere ladilución 10-2. Indicar
los pasos a seguir y detallar como se prepara esa dilución.
1.8. A partir de una muestra de agua ¿Cómo prepararía 500 ml de la dilución 10-1? Expliqué la
elaboración del mismo volumen de dicha dilución pero partiendo de una muestra sólida, por
ejemplo, una muestra de suelo.

Como ya se ha indicado, en ocasiones, debido a la baja densidad de microorganismos, es precisoconcentrar la muestra mediante filtración o centrifugación. Este hecho requiere que para su
manipulación posterior, los filtros o los pellets obtenidos se resuspendan en un volumen determinado
de diluyente. En este caso es preciso determinar el factor de concentración con el que se trabaja. Por
ejemplo:
10 ml Muestra filtrados
Facto de concntración =

1 ml de concentrado 10X
1 ml Diluyente...