como hacer copia
Páginas: 14 (3404 palabras)
Publicado: 23 de enero de 2014
REPRODUCIBILITY OF A QUANTIFICATION ASSAY, NUCLISENS HIV - 1
QT, IN HIV POSITIVE PLASMA SAMPLES
GABRIELA MUÑOZ G. y BQ. MAURICIO VENEGAS S.1
1 Laboratorio de PCR - Gastroenterología, Centro de Gastroenterología. Hospital Clínico de la Universidad de Chile.
The viral load quantification for Human Immunodeficiency Virus in infected patients has been proved to be a valuable test as a goodpredictor for infection progression and antiviral treatment response. The reproducibility of a new viral load assay, Nuclisens HIV-1 QTTM, was assesed by comparing different volume plasma samples in 11 HIV positive patients. Each sample was tested at least twice, in the same or different runs. A total of 29 tests were done. The best reproducibility was obtained when using an initial input equalor greater than 500 µl of plasma, with a precision rate of 0.18 and a coefficient of variation of 20%. The intra and inter - assay variation was 0.19 and 0.07, respectively. The good reproducibility found in this study, the easy performance and the wide linear range of quantification makes this assay fully recommended as a routine test for HIV viral load in HIV-1 infected patients.
Key words:HIV-1, Viral load, Nuclisens, HIV-1 QTTM.
INTRODUCCIÓN
Hasta hace unos pocos años, la evaluación de los pacientes con infección por VIH se basaba exclusivamente en el recuento de las subpoblaciones linfocitarias, especialmente de células T del tipo CD4+. Sin embargo, con el desarrollo creciente de métodos de biología molecular, hoy es posible cuantificar la cantidad de virus que circula en lasangre y en otros fluidos biológicos. Esta medición es lo que llamamos carga viral, la cual se expresa en número de copias del genoma viral por mililitro de muestra, que en el caso del VIH corresponde a copias de ARN /ml.
La determinación de la carga viral ha demostrado ser un valioso marcador para la predicción del progreso de la enfermedad y para el monitoreo de la eficacia de una terapiaantiviral en los pacientes VIH/SIDA.1
En 1997 nuestro laboratorio evaluó una nueva técnica comercial para la medición de la replicación viral en pacientes infectados por VIH-1 denominada NUCLISENS HIV-1 QT® (Organon Teknika). Esta corresponde a la nueva generación de la técnica de NASBA, donde se ha mantenido el principio del método (3SR, Self Sustained Sequence Replication) y se ha aumentado ellímite inferior de sensibilidad de 400 copias a 40 copias de ARN /ml.
Es nuestro interés dar a conocer los resultados obtenidos en la evaluación de esta metodología puesto que ésta se está utilizando de rutina desde 1997 para el control de los pacientes beneficiarios del Sistema Nacional de Servicios de Salud (SNSS), con un promedio de 4.000 exámenes anuales.
A la fecha, existen en el mercadonacional tres alternativas comerciales para la cuantifica-ción de VIH-1: Amplicor-HIV Monitor® (Roche Molecular Systems), Quantiplex HIV-RNA Assay® (Chiron Corporation) y Nuclisens HIV-1 QT® (Organon -Teknika). Cada una de ellas está basada en un método diferente: amplificación de ADN por RPC-TR cuantitativa, amplificación de señales (branched DNA) y amplificación de secuencias de ARN,respectivamente.
La técnica Nuclisens se basa en la co-amplificación del ARN del VIH-1 de una muestra junto con tres calibradores internos de alta, mediana y baja concentración, lo cual permite una correcta evaluación de la eficiencia de la amplificación individual de cada muestra. La amplificación se desarrolla mediante tres enzimas que no requieren cambios de temperatura (reacción isotérmica),obteniéndose una acumulación exponencial de ARN viral a través de transcripciones y retrotranscripciones utilizando ADN como intermediario. La cantidad de ARN que se obtiene es medida por electroquimioluminiscencia (ECL) a través de sondas marcadas con rutenio y perlas magnéticas que capturan el ARN. El rango de sensibilidad de este método se describe entre 80 y 107 copias de ARN/ml para un volumen...
QT, IN HIV POSITIVE PLASMA SAMPLES
GABRIELA MUÑOZ G. y BQ. MAURICIO VENEGAS S.1
1 Laboratorio de PCR - Gastroenterología, Centro de Gastroenterología. Hospital Clínico de la Universidad de Chile.
The viral load quantification for Human Immunodeficiency Virus in infected patients has been proved to be a valuable test as a goodpredictor for infection progression and antiviral treatment response. The reproducibility of a new viral load assay, Nuclisens HIV-1 QTTM, was assesed by comparing different volume plasma samples in 11 HIV positive patients. Each sample was tested at least twice, in the same or different runs. A total of 29 tests were done. The best reproducibility was obtained when using an initial input equalor greater than 500 µl of plasma, with a precision rate of 0.18 and a coefficient of variation of 20%. The intra and inter - assay variation was 0.19 and 0.07, respectively. The good reproducibility found in this study, the easy performance and the wide linear range of quantification makes this assay fully recommended as a routine test for HIV viral load in HIV-1 infected patients.
Key words:HIV-1, Viral load, Nuclisens, HIV-1 QTTM.
INTRODUCCIÓN
Hasta hace unos pocos años, la evaluación de los pacientes con infección por VIH se basaba exclusivamente en el recuento de las subpoblaciones linfocitarias, especialmente de células T del tipo CD4+. Sin embargo, con el desarrollo creciente de métodos de biología molecular, hoy es posible cuantificar la cantidad de virus que circula en lasangre y en otros fluidos biológicos. Esta medición es lo que llamamos carga viral, la cual se expresa en número de copias del genoma viral por mililitro de muestra, que en el caso del VIH corresponde a copias de ARN /ml.
La determinación de la carga viral ha demostrado ser un valioso marcador para la predicción del progreso de la enfermedad y para el monitoreo de la eficacia de una terapiaantiviral en los pacientes VIH/SIDA.1
En 1997 nuestro laboratorio evaluó una nueva técnica comercial para la medición de la replicación viral en pacientes infectados por VIH-1 denominada NUCLISENS HIV-1 QT® (Organon Teknika). Esta corresponde a la nueva generación de la técnica de NASBA, donde se ha mantenido el principio del método (3SR, Self Sustained Sequence Replication) y se ha aumentado ellímite inferior de sensibilidad de 400 copias a 40 copias de ARN /ml.
Es nuestro interés dar a conocer los resultados obtenidos en la evaluación de esta metodología puesto que ésta se está utilizando de rutina desde 1997 para el control de los pacientes beneficiarios del Sistema Nacional de Servicios de Salud (SNSS), con un promedio de 4.000 exámenes anuales.
A la fecha, existen en el mercadonacional tres alternativas comerciales para la cuantifica-ción de VIH-1: Amplicor-HIV Monitor® (Roche Molecular Systems), Quantiplex HIV-RNA Assay® (Chiron Corporation) y Nuclisens HIV-1 QT® (Organon -Teknika). Cada una de ellas está basada en un método diferente: amplificación de ADN por RPC-TR cuantitativa, amplificación de señales (branched DNA) y amplificación de secuencias de ARN,respectivamente.
La técnica Nuclisens se basa en la co-amplificación del ARN del VIH-1 de una muestra junto con tres calibradores internos de alta, mediana y baja concentración, lo cual permite una correcta evaluación de la eficiencia de la amplificación individual de cada muestra. La amplificación se desarrolla mediante tres enzimas que no requieren cambios de temperatura (reacción isotérmica),obteniéndose una acumulación exponencial de ARN viral a través de transcripciones y retrotranscripciones utilizando ADN como intermediario. La cantidad de ARN que se obtiene es medida por electroquimioluminiscencia (ECL) a través de sondas marcadas con rutenio y perlas magnéticas que capturan el ARN. El rango de sensibilidad de este método se describe entre 80 y 107 copias de ARN/ml para un volumen...
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