Conservacion bacterias no filamentosas

Montaje y evaluación de métodos de conservación
Para bacterias no filamentosas

RESUMEN

Cepas de E.Coli fueron conservadas por el método a largo plazo de liofilización utilizando como crioprotectante glicerol, elaborando y evaluando un banco de células primario de esta cepa. Materiales y métodos. Para determinar el recuento de células viables/mL se tomo inoculo de una suspensión de E.Colien caldo BHI, se verifico la pureza mediante coloración de Gram, se realizaron diluciones seriadas y se sembraron respectivamente por superficie en agar BHI, a la vez se realizo el banco de células de trabajo en medio BHI junto con el glicerol, se evaluaron a 3 temperaturas: 20ºC, 7ºC y temperatura ambiente. La eficacia de este método de conservación se realizo mediante la evaluación de laviabilidad del banco mediante recuento en placa y se calculo el porcentaje de recuperación. Resultados: La evaluación del banco en glicerol mostro concentraciones en UFC/ml correspondientes a las temperaturas a evaluar que arrojaron datos de viabilidad relativamente bajos. La criopreservacion a -20°c fue la mejor en este caso debido a que el porcentaje de viabilidad fue el que menos cambio conrespecto al inicial, bajo un exponencial de la concentración inicial, las temperaturas superiores mostraron que la viabilidad bajo en un 100% en menos de 2 semanas de conservación. Conclusiones: La conservación con glicerol es adecuada para cepas como E.Coli ya que presento un porcentaje de viabilidad superior al 50%, la mejor técnica empleada en este caso para conservación de cepas es lacriopreservacion con glicerol.

Palabras claves: criopreservación, viabilidad, conservación, glicerol, banco.

INTRODUCCIÓN

La conservación de cepas microbianas es una importante práctica tanto en la industria como en la investigación, pues esta garantiza que el microorganismo con el que se trabaja perdure en el tiempo con sus características tanto metabólicas como fisiológicas. Para evaluar un métodode conservación se tendrán que lograr objetivos finales como que el cultivo termine puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservación; que durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células, y por último, que estas células permanezcan genéticamente estables. Entre los métodos de conservación los más usados en cuanto a la necesidad demantener el banco por largos periodos es la criopreservacion con protectantes de la membrana celular que evitan la lisis de esta por efecto de la cristalización del agua al interior de la célula a causa de la congelación. Los crioprotectantes como el glicerol, el dimetilsulfoxido o la leche descremada evitan la congelación interna de la célula y disminuyen su metabolismo impidiendo el envejecimientocelular.[5] la temperatura por su parte juega un papel igual de importante pues debe esta permitir que por efectos del frio la célula pare y/o disminuya su metabolismo para evitar tanto la senescencia de esta y el envejecimiento de sus membranas.

Uno de los métodos más recomendados para la conservación de E. coli es la congelación entre –20 ºC y –70 ºC, donde comúnmente se utiliza glicerol odimetilsulfóxido como criopreservante. Los bancos de E. coli que se conservan por esta vía pueden mantener altas viabilidades por más de 10 años. A pesar de que es una práctica común están poco documentadas las diferencias que existen entre las cepas de interés biotecnológico en cuanto a la resistencia a la congelación. En este estudio se evaluó un banco de cepas primario utilizando glicerol al25% (v/v) como técnica de conservación.

MATERIALES Y METODOS

MUESTRAS
Suspensión celular de Escherichia coli.

REACTIVOS Y MEDIOS.
Se utilizo caldo BHI con glicerol al 50%, Agar BHI, colorantes de Gram y Aceite de inmersión.

DETERMINACION DE LA POBLACION INICIAL A PARTIR DE LA CUAL SE HACE EL BANCO DE CEPAS DE TRABAJO.
Se tomo 0,5 mL del cultivo de Escherichia coli, al se le hizo un...