conservacion cepas microbianas

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30:12

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La conservación de cepas microbianas
María Dolores García López y Federico Uruburu Fernández
Colección Española de Cultivos Tipo (CECT). Universitat de València. 46100 Burjassot (València).
E-mail: cect@uv.es - http://www.uv.es/cect.

L

os tres objetivos que hay que alcanzar para
conservar correctamente las cepas microbianas en los laboratoriosde microbiología son: que
el cultivo a conservar sea puro, evitando que se
produzcan contaminaciones durante el proceso de
conservación; que durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células,
y por último, que estas células permanezcan genéticamente estables. Los dos primeros objetivos no
son muy difíciles de conseguir cuando se conoce
bien la técnicamicrobiológica, pero el tercero
puede presentar dificultades, y este es el motivo
por el cual existen varios métodos de conservación
para los microorganismos, y ninguno de ellos es
de utilización general. Vamos a resumir estos
métodos agrupándolos en tres apartados, que son:
Métodos de elección o de conservación a largo
plazo, métodos alternativos y métodos restringidos.
1.- Métodos de elección o deconservación a
largo plazo.

S

on los mejores porque en ellos se paraliza el
crecimiento de las células microbianas, pero
éstas no han muerto. Así se garantiza al máximo
la estabilidad genética, por evitarse la aparición de
generaciones sucesivas. Aún así no se puede descartar algún cambio originado por el método preparatorio en si mismo. Los métodos de conservación pertenecientes a estegrupo son dos: congelación y liofilización.
1.1.- Conservación por congelación.
Se congelan las células en suspensión en un
líquido con un agente crioprotector y se guardan a
temperaturas inferiores a cero grados centígrados,
con lo que el agua se congela. De esta forma, al no
disponer las células de agua en forma líquida, no
hay crecimiento. Cuando se quiere trabajar con
las células asíconservadas, se recuperan subiendo la temperatura. Este es el mejor método de
conservación desde todos los puntos de vista, pero
tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales, y además existe el peligro de que algún fallo
del sistema produzca una subida no deseada de la
temperatura durante el almacenamiento. También

resulta ser el método más molesto para realizar el
envío de lascepas. Los cuatro factores que influyen en la viabilidad y estabilidad de las células
conservadas por este método son los siguientes:
1.1.1.- Edad de las células: En la mayoría de
los casos conviene utilizar células maduras del
inicio de la fase estacionaria de la curva de crecimiento, pero cuando se trate de organismos que
presenten en su ciclo vital algún estado que les
prepare para laresistencia a condiciones adversas, es preferible alcanzar este estado. Esto sucede en el caso de microorganismos que esporulan,
en algunos pleomórficos e incluso en algunos más
sencillos.
1.1.2.- Velocidad en la congelación y descongelación: Aunque hay programas de congelación bien estandarizados para determinados casos
o circunstancias, en general es mejor que las
variaciones de la temperaturasean rápidas, tanto
para la congelación como para la descongelación,
por lo que para descongelar conviene poner las
células a 37ºC.
1.1.3.- Temperatura de almacenamiento:
Debe ser lo más baja posible. Lo mejor es guardar
tubos cerrados o sellados, que contengan las células microbianas, sumergidos en nitrógeno líquido,
que tiene una temperatura de –195ºC, o bien en la
fase gaseosa delnitrógeno líquido, con una temperatura de –140ºC.
En el mercado existen variados tipos de armarios congeladores, de los cuales los más aconsejables son los que alcanzan temperaturas por debajo de –70ºC. Aquellos que sólo alcanzan temperaturas entre –20ºC y –40ºC, como ocurre con la
mayoría, no son aconsejables, entre otras cosas
porque debido a la gran concentración de solutos
que existen en la...