Criopreservacion

El éxito en la criopreservación celular ha sido logra-do gracias a la utilización de sustancias crioprotec-toras que disminuyen la concentración intra y extra-celular de electrolitos y la excesiva deshidratacióncelular a temperaturas bajo cero, reducen la formación    de cristales de hielo intracelular durante la congelación.         También inhiben la actividad de muchasenzimas disminuyendo oeliminando la actividad deradicales libres responsables de lisis celular, antes,durante y luego de la congelación y descongelación(Carpenter et al., 1998). La criopreservación celu-lar consiste en un enfriamiento de la célula a bajastemperaturas para lograr detener totalmente el me-tabolismo celular y así asegurar su conservación porlargo tiempo.Los crioprotectores pueden producir dos tiposdealteración a la célula, una funcional, que ocasionainactivación proteica y enzimática; y otra estructu-ral, relacionada con el estrés osmótico dado por loscambios de volumen experimentados por la célulaespermática (Fahy, 1986).cRiopRotectoRes que penetRanlibRemente la célulaSon sustancias de bajo peso molecular que penetranfácilmente la célula, reemplazando el agua intracelu-lar por medio de laintroducción de radicales hidroxilo. Estos reemplazan osmóticamente el agua intrace-lular antes y durante el congelamiento y disminuyenel punto de congelación del agua (Medeiros, 2002),lo que combinado con una lenta tasa de enfriamien-to disminuye la formación de cristales de hielo. Sonesencialmente alcoholes (glicerol, etilenglicol, 1-2propanediol, propilenglicol, entre otros). Sus pesosmolecularesvarían entre 32 y 212 Daltons.
Revista de Medicina Veterinaria Nº 14 / Julio - diciembre 200796 /Jorge Alberto Neira / Germán Francisco Ramírez / Sergio Andrés León García / Diego Andrés Moreno GarcíacRiopRotectoRes que no penetRanla célulaSon crioprotectores,  que ejercen su acción protegien-do el exterior de la membrana celular que es frecuen-temente lesionada por el efecto de las altasconcen-traciones iónicas; además algunas de estas moléculastienen un efecto reparador de membrana, gracias alos lípidos que contienen (Whittingham, 1971). Pue-den ser de bajo peso molecular como sacarosa, glu-cosa, manitol, trealosa y rafinosa, las cuales aumen-tan la presión osmótica extracelular produciendo ladeshidratación de la célula (MacGann, 1978); o dealto peso molecular como elpolivinil-pirrolidona(PVP), el Dextran, el suero de albúmina bovina, al-gunos aminoácidos como la L-glutamina, histidina yglicina - betaína.La L-glutamina es un aminoácido que posee un efec-to crioprotector en las células animales, en donde sumecanismo de acción es actuar de forma extracelularprotegiendo la membrana plasmática del espermato-zoide equino; lo cual permite una mejor protecciónal momento de lacriopreservación y así una mejoríaen la motilidad y viabilidad del espermatozoide almomento de descongelar, una vez asociada a otroscrioprotectores como el glicerol.mateRiales y métodoscolecta y pRocesamiento del semenLas colectas del material seminal fueron realizadasen el criadero de caballos criollos colombianos VillaDaniela, ubicado en el Municipio de Cajicá (Cundi-namarca), en la Sabana de Bogotá, a unaaltura de2650 metros sobre el nivel del mar y una tempera-tura promedio de 13° C; para tal efecto se utilizaroncuatro ejemplares criollos colombianos, entre los 38y los 60 meses de edad, que presentaron excelentelíbido y habilidad para copular y liberar el semen enla vagina artificial.La metodología empleada se basó en la utilización decuatro crioprotectores aplicados a cada reproductortrabajado,cuya composición era desconocida paralos evaluadores para evitar subjetividad. Las mues-tras se dividieron en siete lotes donde el máximo dereproductores por lote fue cuatro y el mínimo dos.Al reproductor número uno se le tomaron seis mues-tras; al reproductor número dos, siete; al reproductornúmero tres, seis y al reproductor número cuatro,dos; para un total de 21 muestras.Para el desarrollo...