Cromatografía De Adsorción En Columna Obtención De Pigmentos Naturales

La cromatografía es una técnica separativa empleada para separar los componentes de una mezcla y como criterio de pureza e identificación en algunos casos. Se basa en un principio de distribución de un componente entre dos fases: una móvil que fluye a través de una fase fija o estacionaria.
Dentro de las cromatografías de adsorción tenemos a la ya conocida C.C.D. (cromatografía en capa delgada)la cual será utilizada en este trabajo como criterio de identificación y pureza; y la cromatografía en columna. Esta última se emplea para separaciones a escala preparativa ya que permite trabajar con gramos de muestra.
La columna tiene como ventaja sobre la C.C.P. (cromatografía en capa preparativa)el hecho de contar con dos nuevas variables separativas: 1) el cambio secuencial de polaridaddel solvente de elusión, 2) el desplazamiento ilimitado del frente del solvente.

En el siguiente trabajo se utilizará la técnica de cromatografía de adsorción en columna para separar pigmentos naturales.

Los pigmentos naturales pueden agruparse según tres tipos fundamentales de estructuras:
1. Porfirinas: Son derivados de la estructura porfirínica, que consiste en cuatro anillos pirrólicosheterocíclicos (conteniendo N) unidos por cuatro grupos metileno, formando un sistema total con dobles enlaces conjugados. Un tipo de porfirinas son las clorofilas (verdes) presentes en todos los organismos fotosintéticos.
2. Carotenoides: Son terpenos o derivados terpénicos coloreados, formados por combinación de isopreno con dobles ligaduras conjugadas. Un tipo de carotenoides son los carotenosque contribuyen en gran medida al conjunto de colores de los vegetales.
3. Flavonoides: Son aquellos que presentan como unidad estructural. Un tipo de flavonoides son las flavonas.

Objetivo
Lograr el manejo de la técnica cromatográfica de adsorción, aplicándola a la separación de pigmentos naturales.

Desarrollo
A. Extracción de los pigmentos de hojasverdes (espinaca y acelga)
1. Se trituran las hojas en la licuadora con etanol.
2. Filtrado con algodón y posteriormente con papel de filtro para retirar residuos muy pequeños.
3. Extracción con acetato de etilo.
4. Evaporación en rotavap.

B. C.C.D. del extracto de pigmentos
1. Análisis del número de componentes del extracto por C.C.D.
2. Búsqueda de la secuencia de solventes a utilizar parala realización de la cromatografía de columna.

C. Separación de los componentes del extracto por cromatografía de columna
1. Preparación de la columna.
• Se arma la columna como lo indica la figura 3 de la guía de laboratorio, sólo que dejamos su extremo superior sin cubrir para que se pueda aplicar presión y de este modo acelerar la corrida.
• Se introduce un pequeño trozo de algodón quese lo empuja hasta el final de la columna con una varilla de vidrio alargada.
• Se humedece el algodón con el solvente de armado (que se elegirá a continuación) y se lo apisona.
• Se vuelca el solvente hasta completar cierta medida.
• Se arma una suspensión con 7g. de sílica y el solvente de armado (en un recipiente aparte), y a esta mezcla se la vuelca en la columna.
• Se abre el robinetepara que comience a drenar el solvente y se acomode el adsorbente. Se deja fluir hasta que se acabe el volumen de solvente (nunca se deja secar el adsorbente del todo).
• Se siembra el extracto.
• Se vuelca con suavidad el primer solvente de elusión.
• A medida que desciende la muestra sembrada sobre el adsorbente, se va recogiendo el líquido en tubos de ensayo.
2. Desarrollo de la cromatografíacon posterior análisis de las fracciones obtenidas por C.C.D.

D. Realización del espectro U.V. de carotenos y clorofilas

Resultados
B. C.C.D. del extracto de pigmentos









De la observación de las C.C.D se deduce que hay al menos, tres compuestos identificables en la muestra.

Para el revelado de las placas se utiliza luz UV, si embargo por tratarse de pigmentos, las...