Cromatografía de columna de los colorantes del tomate y la zanahoria

Cromatografía de columna de los colorantes del tomate y la zanahoria
Facultad de Ciencias, Escuela de Química
Laboratorio de Química Orgánica para Biólogos
27 de Octubre de 2012



Resumen
La IUPAC define a la cromatografía como un método físico de separación mediante el cuál los componentes de una mezcla se separan por distribución entre dosfases, una estacionaria (FE) y una móvil (FM). Existen varios tipos de cromatografía, entre ellas se encuentra la cromatografía de columna que consiste en la obtención de cantidades significativas y puras de los componentes de una muestra. En este trabajo se realizó la cromatografía de columna para una muestra de carotenoides, con una suspensión de sílica gel como fase estacionaria y dosdisolventes, una mezcla de diclorometano-hexano 1,9 y diclorometano puro como fase móvil. Se pudo obtener en 4 fracciones a los componentes de la mezcla. Posteriormente a cada una de ellas se les aplicó la cromatografía de capa fina; dando como resultado el β-caroteno presente en la primera y el Licopeno en la última.


Objetivos


1.- Conocer y poner en práctica el método de cromatografía decolumna para separar los carotenoides: Licopeno y β-caroteno.
2.- Aplicar la técnica de cromatografía de capa fina para evaluar la efectividad de la separación mediante cromatografía de columna.






Introducción
El término cromatografía (del griego chroma, color y graphos, escritura) fue utilizado por el botánico ruso Tswett en su experiencia publicada en 1906 para definir el procedimientode separar un extracto vegetal a través de una columna rellena con carbonato de calcio. Los diferentes colores de los pigmentos obtenidos no sólo inspiraron al nombre sino además propiciaron el inicio formal de una metodología que revolucionó los campos más diversos de la química.

En la cromatografía de columna la homogeneidad del empaquetamiento está dada por un asentamiento parejo de surelleno, correspondiendo a esto el relleno de la columna se puede hacer de tres maneras:
- Llenado en seco. Para este procedimiento vertemos el adsorbente en la columna y dándole golpes suaves a la columna buscamos que el adsorbente quede lo mas compactado posible.
- Llenado húmedo. De este método existen dos tipos
o Tipo papilla. Se realiza una solución más o menos homogénea del adsorbentecon el disolvente la cual se vierte en la columna mientras se le dan golpes suaves a la columna para que haya una mejor compactación.
o Para el segundo tipo de llenado húmedo se vierte una cierta cantidad del disolvente en la columna y espolvoreamos el adsorbente en la columna y golpeándola suavemente tratamos de acomodar el adsorbente para que quede en su superficie superior lo más recto posible.Metodología Experimental
Coloca un tapón de algodón en el extremo inferior de una bureta, (con cuidado de no introducirse dentro del estrechamiento de la columna o en el orificio de la llave).
Fija la columna a un soporte universal con una pinza, de manera que quede bien derecha.
Agrega un poco de arena de aproximadamente 1 o 2 milímetros.
Prepara una suspensión de silicagel con una porción del disolvente hexano y viértela dentro de la columna con velocidad uniforme, golpeando suavemente las paredes de la columna para que el adsorbente se deposite de manera regular y sin burbujas.
Deja asentar y abre la llave para dejar salir el exceso del disolvente.
Cuando el extremo superior esté a punto de secarse, apenas cubierto por una altura del disolvente de 1-2 mm,coloca cuidadosamente y sin alterar la superficie de 1,5ml de la solución de los carotenos.
Comienza a correr la columna abriendo la llave. (la velocidad de flujo apropiada para una buena separación no debe ser muy lenta ni muy rápida. Aproximadamente 25-30 gotas por minuto.
Una vez que toda la muestra se encuentre dentro del adsorbente, se agrega la suficiente mezcla de disolvente diclorometano-...