Cromatografía En Columna

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
* Preparación de la columna
La relación altura/diámetro de la columna debe ser 10:1 y la cantidad de adsorbente es de 50g/g de muestra.(20g/g)
Sujetar la columna condos pinzas y de manera completamente vertical.(si no el disolvente no avanzará uniformemente)
Llenar la columna con eluyente hasta la mitad
Verter 0.5 a 1cm de arena en el fondo.
Verter el adsorbentecomo una papilla en el disolvente o seco en pequeñas porciones. Durante la adición dejar correr eluyente lentamente.
Dejar el disolvente correr, golpeando suavemente la columna (para que no hayangrietas o burbujas). No dejar nunca la columna seca.
Al mezclar SiO2 con el eluyente puede calentarse, entonces se hace una mezcla disolvente adsorbente y se agita. Luego se vierte el adsorbente húmedoen la columna como antes.
La parte superior del adsorbente debe quedar horizontal y protegerla con algodón, un disco de pape de filtro o una capa de arena de 1 cm.
Dejar el nivel del eluyente a1-2mm por encima del protector.
* Introducción de la muestra
La disolución de la muestra concentrada en disolvente de baja polaridad, o menos polar que el eluyente.
Abrir la llave inferior hastaalcanzar 1-2mm por encima del absorvente
Verter la muestra con pipeta por las paredes de la columna con la llave cerrada y abrirla hasta alcanzar de nuevo 1-2mm por encima del adsorbente. Repetirvarias veces con pequeñas cantidades de eluyente. (Con esto se asegura que la muestra se adsorba en una banda lo mas estrecha posible)
Depositar una capa de arena de 1cm en la parte superior de la columna-------------------------------------------------
Añadir eluyente limpiando las paredes hasta llenarla y se continua la elución con grandes volúmenes de eluyente.
La disolución de la muestraconcentrada se vierte con pipeta por las paredes de la columna con la llave cerrada.
Abrir la llave inferior hasta alcanzar 1-2mm por encima de la arena.
Se cierra la llave y se añaden 1-2ml de...