Cromatografía Gas – Líquido (Cgl) Y

Introducción
La cromatografía gaseosa es un método para separar componentes de mezclas de compuestos volátiles. En general, se la emplea con el fin de identificar y determinar el número de componentes de una mezcla. En este tipo de cromatografía, la fase móvil es un gas que circula a cierta velocidad transportando la muestra vaporizada, al mismo tiempo que ésta logra interactuar con al faseestacionaria. De este modo, se consigue la separación selectiva.
Este sistema se halla en el interior de una columna, sometida a una temperatura suficiente como para mantener a los compuestos en el estado gaseoso. En esta técnica, la temperatura es una variable que puede regularse con el fin de acelerar la corrida. Por el extremo de la columna, van saliendo los compuestos de acuerdo al tiempo deinteracción con el relleno de la columna. Es decir, si el relleno es un tipo de sílica polar, aquellos compuestos que tengan menor posibilidad de formar uniones con la sílica, serán los primeros en salir; mientras que los componentes más polares, saldrán en un lapso de tiempo mayor (concepto de tr).
Conectado al aparato de CGL, existe un detector que traducirá estas señales para que unregistrador pueda graficar el cromatograma correspondiente.
Como restricción, este método requiere que la muestra sea volátil. Para incrementar la presión de vapor de algunos compuestos se recurre a la derivatización de los grupos funcionales.

La cromatografía líquida de alta resolución es, conceptualmente, similar a la cromatografía líquida tradicional. La diferencia fundamental radica en el tamañode las partículas del soporte (relleno de la columna, fase estacionaria). Al ser éstas tan pequeñas y homogéneas, permiten un empaquetamiento resistente a elevadas presiones. En esta técnica, a diferencia de CGL, la fase móvil es un solvente cuya polaridad puede ser regulada a fin de disminuir los tiempos de retención de los compuestos.
En la HPLC tradicional, el comportamiento de lassustancias con la fase estacionaria es análogo al de cromatografía de adsorción. Pero existe una variante para esta técnica: es la denominada HPLC en fase reversa, donde la fase estacionaria es no polar (hidrofóbica) y la fase móvil es polar (hidrofílica). Esta inversión en las fases, implica la inversión en el orden de salida de los compuestos. Es decir, los componentes más polares, serán los primerosen salir, mientras que los menos polares quedarán más retenidos en la fase estacionaria.

En el siguiente trabajo práctico, se procederá a la preparación de los compuestos partiendo de hidratos de carbono, para su posterior análisis por CGL. Por otro lado, también se realizará una corrida de HPLC en fase reversa, para una mezcla de aminoácidos.


Objetivo
Conocer el empleo de lastécnicas cromatográficas de CGL y HPLC.


Desarrollo
A. CGL
1. Se recibe una muestra incógnita que contiene una mezcla de carbohidratos, a ésta se le mide el valor de PH verificando que sea mayor a 7, de lo contrario, se deberá agregar unas gotas de NaOH.
2. Se le incorpora a la muestra NaBH4 y se lo deja reaccionar por 90 minutos aproximadamente.
3. Se agrega AcOH para cortar la reacción y selleva a sequedad en rotavap.
4. Se acetilan los alditoles por agregado de piridina y anhídrido acético, calentando.
5. La solución se extrae con cloruro de metileno.
6. La fase orgánica se evapora en rotavap.
7. Se realiza una corrida en CGL de una mezcla de azúcares convenientemente derivatizados, que utilizaremos como patrones.
8. Se efectúan varias corridas con compuestos cuya identidad sedesconoce.
9. Se procede al análisis de los resultados obtenidos y se determina la identidad de cada muestra incógnita.



B. HPLC en fase reversa
1. Se realizan dos corridas de mezclas binarias de aminoácidos.
2. Se analizan los resultados.

NOTA: Las condiciones de trabajo no fueron registradas (torpeza del alumno)


Resultados
A. CGL
Mezcla de Patrones Muestra Incógnita
Azúcar...