cromatografia de liquidos

Material de apoyo para ElectroQuímica Analítica y Cromatografía

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III. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
El proceso que consiste en hacer pasar un líquido o un gas a lo largo de una columna cromatográfica se denomina
elución. Como se observa en la figura 21, la fase móvil que entra a la columna se llama eluente. Al salir de la columna se llama
eluato o efluente.

Figura 21. Diferencia entreeluente y eluato.
La velocidad de la fase móvil en una columna puede expresarse como flujo volumétrico (gasto en volumen, mL/min) o
como gasto lineal, cm/min. Generalmente se trabaja de modo que el flujo de solvente que pasa por la columna sea constante
durante todo el experimento.
Supongamos que inyectamos a la columna cromatográfica una mezcla que contiene tres componentes, a los quellamaremos A, B y C. En la figura 22 se muestra un cromatograma idealizado que se obtendría en estas condiciones.

Figura 22. Parámetros que pueden identificarse en un cromatograma.
•

Cromatograma. Es la represtación gráfica del tiempo que transcurre desde la inyección contra la respuesta registrada por el
detector.

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Tiempo de retención (tR) Es el tiempo necesario después de la inyección dela mezcla para que la muestra alcance el
detector. Manteniendo las mismas condiciones experimentales, cada substancia tendrá su propio tiempo de retención, único y
característico de ella. El tiempo de retención se mide desde el inicio de la inyección hasta la parte más alta del pico
cromatográfico. Este tiempo puede medirse también en forma indirecta como el volumen de fase móvil que eluyeentre la
introducción del soluto y la aparición del máximo del pico del mismo, lo que se conoce como volumen de retención (VR).

•

Tiempo muerto (tM) Es el tiempo de retención para un soluto inerte, que no sea retenido en la columna. Notar que tM es en
realidad el tiempo necesario para que la fase móvil recorra la longitud de la columna. En los cromatogramas reales, tM no
siempre aparece. Encromatografía de gases, cuando se usa un detector de ionización de flama, puede inyectarse aire junto
con la muestra para que aparezca el pico de aire correspondiente al tiempo muerto. El volumen de la fase móvil necesario
para desplazar un soluto no retenido desde el inyector al detector se conoce como volumen muerto (VM) o volumen de la fase
móvil en la columna.

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Tiempo de retencióncorregido (tR’) Se define como la diferencia entre el tiempo de retención y el tiempo muerto.

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tR’ = tR – tM
Si todos los componentes de la mezcla interaccionan con la fase estacionaria, ninguno de ellos eluirá al volumen de
retención. Puede darse el caso de que el pico correspondiente al tiempo muerto no aparezca tampocoen el caso de que el
detector no sea sensible a ese compuesto.
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Retención relativa (α) Para caracterizar las distancias entre los máximos de dos picos cromatográficos consecutivos, se
utiliza el factor de selectividad o de retención relativa, definido como la razón entre el tiempo de retención neto de los dos
componentes, que puede calcularse directamente del cromatograma.

α=

tR2
tR1

t R 2 > t R 1 para que α > 1

Cuando α = 1, es evidente, según la ecuación, que la resolución es nula, independientemente del número de platos
teóricos que tenga la columna, ya que entonces tR1 = tR2. La selectividad de una columna se puede mejorar modificando el
coeficiente de distribución, K, y el volumen de la fase estacionaria, VS. El coeficiente de distribución, K, se modificaalterando
cualquiera de los siguientes parámetros:
a) cambiando la fase móvil, por ejemplo, variando la composición, el pH, la polaridad y la fuerza iónica.
b) sustituyendo la fase estacionaria. En este caso, se puede modificar el tamaño del poro del gel y la superficie del
adsorbente.
c) variando la temperatura
d) modificando el soluto
En cualquier caso, es necesario mantener los valores del...