cromatografia

Trabajo Práctico:

“Cromatografía”







Objetivos:
-Comparar distintas fases móviles y su poder de separación de diversas muestras
-En base a los resultados, realizar una cromatografía en columna con la fase móvil más adecuada y separar así los compuestos de una muestra.

Fundamento:
-Cromatografía de adsorción: Es una técnica de análisis basado en la separación de muestrasgracias a equilibrios de adsorción-desorción de una muestra entre una fase sólida estacionaria (polar) y una líquida móvil (no polar). Si la muestra pasa más tiempo retenida en la fase estacionaria (es decir, la muestra es polar) no se moverá, mientras que si se ve más atraída por la fase móvil recorrerá mayores distancias en menos tiempo.
-Cromatografía en capa fina: La fase estacionaria es una capafina de adsorbente sobre una placa, y la fase móvil es un solvente o mezcla de solventes que recorren la capa por capilaridad. Se desarrolla en una cuba con un fondo de solvente en un ambiente saturado del mismo para evitar que el solvente se volatilice.
-Cromatografía en columna: Se utiliza para separar mezclas. La fase estacionaria es un adsorbente sólido y la fase móvil es un líquido querecorre la fase estacionaria impulsado por la gravedad o una diferencia de presión.

Técnica:
-Preparamos micropipetas a partir de capilares: fundimos la parte media del tubo y después estiramos para formar un tubo más fino que el capilar, al cual le cortamos la punta para obtener un orificio parejo.
-En una placa de silicagel se marcan los puntos de siembra, a unos pocos milímetros de la base,y separados entre sí también. Se deben marcar con lápiz ya que la tinta tiene compuestos que se ven atraídos por la fase móvil. Después se utilizan las micropipetas para sembrar las sustancias en orden (1-Rodamina 2-Verde de bromocresol 3-Azul de metilo 4-Mezcla). Se deja evaporar el solvente de las muestras.
-Se introduce la placa sembrada en una cuba con un fondo de solvente y el aire saturadodel mismo. En nuestro caso fue tolueno. Una vez que el solvente llega por capilaridad hasta casi el final de la placa se la retira de la cuba, se marca hasta donde llegó el solvente y se lo deja evaporar.
-Como utilizamos tolueno, nuestras muestras no dejaron el punto de siembra, por lo que no pudimos realizar los cálculos de relación de frentes. Sin embargo, viendo los resultados de los otrosgrupos concluimos que el mejor solvente para la cromatografía en columna sería etanol porque dejaba una relación de frente de aproximadamente 0,4 entre verde bromocresol y rodamina. También notamos que ningún solvente servía para eluir el azul de metileno, por lo que la mezcla a separar no contendrá ese compuesto.
-Realizamos la cromatografía en la columna provista por la cátedra utilizandoetanol como solvente y un líquido violeta como sustancia problema. Primero agregamos gran cantidad de solvente para eliminar restos de trabajos prácticos anteriores. Desde ese momento tenemos que evitar que la columna se seque porque sino en la sílica podrían formarse burbujas de aire, lo que produciría que la elución fuera despareja, y los componentes se mezclaran al salir. Sembramos la muestracuando queda poco solvente sobre la fase estacionaria, cuando es absorbida agregamos gran cantidad de solvente y hacemos presión con una jeringa. La muestra se separa en una sustancia azul (verde de bromocresol) que es la primera en salir de la columna, y una sustancia rosa (rodamina) que sale al final. Además, en el intervalo desde que sale la última gota de azul puro y la primera gota de rosaobtenemos gotas violetas.
- Al realizar una cromatografía en capa fina (con etanol como solvente) a las tres sustancias obtenidas en la cromatografía en columna, obtenemos una sola mancha par las sustancias rosa y azul, pero dos manchas para la violeta.


Equipo Empleado:


Datos Bibliográficos:
Tolueno
-Liquido incoloro de olor penetrante a temperatura y presión ambientes
-Punto de fusión:...