Cromatografia

CROMATOGRAFIA

INTRODUCCION

Cromatografía de papel se utiliza para el análisis de muestras en base a los componentes de una disolución. Se coloca una pequeña muestra en un extremo del papel y esta se introduce en un solvente preparado para que los componentes de la mezcla suban por el papel de cromatografía separándose unos de otros formando la referencia de frente. Cuando el solvente hallegado al extremo superior del papel se retira para revelar en secado ha fuego lento. Para identificar los componentes de la mezcla se hace por comparación en tablas determinadas.

OBJETIVOS

* Utilizar la cromatografía de papel como método de análisis de aminoácidos.
* Preparar una solución para extracción de componentes de la mezcla en el papel de cromatografía.

MATERIALES YREACTIVOS
* Tira de papel de cromatografía (referencia 10.40), probeta de 100cm3 provista de tapón de caucho, atomizador, estufa, capilar, guantes de nitrilo, gafas, tapabocas y regla.
* Sustancia problema con mezcla de aminoácidos; ninhidrina, al 1%; fase móvil: butanol (4) +acido acético (1) + agua (5).

PROCEDIMIENTO
1. Se aseguro el papel filtro por un extremo a la hendidura del tapónde cucho. En el otro extremo, a una distancia de 2.5 a 3 cm de la parte inferior, se señalo el papel con lápiz trazando una línea y en el centro de ella se coloco cuidadosamente una pequeña gota de la mezcla de aminoácidos, (muestra 2, en isopropanol con concentración al 1%) repitiendo el proceso por tres veces, hasta que la mezcla de aminoácidos pudiera adherirse al papel, se espero por unosminutos hasta que la pequeña mancha en el papel estuviera seca.

Fig 1. Fijación de los aminoácidos en el papel cromatografico.

2. Se lleno la probeta cuidadosamente con la mezcla compuesta por 8 ml de butanol, 2 ml de acido acético y 6 ml de agua, hasta alcanzar 16 ml la fase móvil, se prosiguió a introducir el papel con la muestra hasta una profundidad de 2cm, sin permitir que el papeltoque las paredes del recipiente, para que la fase de dispersión pudiera darse. Se ajusto el tapón y se sello herméticamente, para evitar evaporaciones.

Fig. 1.2 montaje para proceso cromatografico.
3. Se espero cerca de 2:40 horas, hasta que el solvente puesto en practica ascendiera cercad e 11cm, separando los aminoácidos en el papel. Se retiro el papel de la probeta y se prosiguió a marcarla altura hasta la que los aminoácidos fueron separados en la fase móvil.
4. Una vez retirado el papel de la probeta y señalado su dispersión de la fase móvil, se prosiguió a secar la muestra, hasta que las manchas de la dispersión fueran mas pronunciadas, posterior a esto se roció la muestra con ninhidrina; para que completara el revelado de la muestra, se seco nuevamente en la estufa, unaves terminada este proceso aparecieron las manchas las cuales corresponden a los aminoácidos de la mezcla.
5. Se midió la altura de las manchas desde el centro de las mismas, hasta el punto de aplicación de la mezcla inicial, para determinar la distancia recorrida por la fase móvil. Representadas en los resultados obtenidos.

Fig. 1.3 resultado de la fase móvil.
6. Se identifico losaminoácidos, calculando la referencia de frente de cada aminoácido mediante la relación.

Rf= distancia recorrida por la sustancia/distancia recorrida por la fase móvil. Obteniendo los resultados asi.
Para la mancha # 1
Rf= 5.3cm/10.2cm
Rf=0.519cm

Para la mancha #2
Rf=9.1cm/10.2cm
Rf=0.892cm

CUESTIONARIO

1. La ninhidrina o hidrato de tricetohidrindeno, como ya se mencionó, reaccionacon los aminoácidos provenientes de la transpiración de la piel revelando impresiones lofoscópicas en un período de reacción que oscila de una o cinco horas, pero si se aplica calor, puede acelerarse el proceso hasta en menos de diez minutos.

"La reacción de la ninhidrina cuantifica la reacción de los aminoácidos del grupo alfa amino. La ninhidrina reacciona rápidamente con el grupo amino,...