Cromatografia

1. OBJECTIUS
Separar diferents aminoàcids utilitzant la cromatografia en capa prima sobre gel de sílice.
Revelar la placa amb ninhidrina.
Calcular i justificar el valor de l’Rf (coeficient de repartiment) per a cadascun dels aminoàcids.
Identificar els diferents aminoàcids de la mostra problema.
Escollir el millor sistema d’elució per desenvolupar la separació cromatogràfica.

2. DIAGRAMADE BLOCS DEL TREBALL EXPERIMENTAL




















3. MATERIAL I REACTIUS
Material
Reactius
Placa de gel de sílice Tubs d’assaigs curts
Patrons al 0,25% en isopropanol
o
Propanol/aigua (1:9) de diferents aminoàcids.
Gradeta
Solvent: n-butanol/àcid acètic glacial/aigua (3:1:1)
Capil·lars
Solvent: etanol/amoníac al 30% (7:3)
Provetes
Revelador: ninhidrina 0,2%en acetona o aigua
Cambra de desenvolupament cromatogràfic
Leucina
Paper de filtre
Glicina
Assecador
Fenilalanina

Lisina

Mostra problema

4. DADES EXPERIMENTALS, CÀLCULS I RESULTATS
El nostre equip hem treballat amb el dissolvent (7:3), etanol/amoníac al 30%.
Hem contrastat les dades amb el grup format pel Rafael, Aitor i Alfonso, que treballaven amb el dissolvent n-butanol/àcidacètic glacial/aigua (3:1:1).
Fase mòbil: els dissolvents que utilzem.
Fase estacionaria: la placa.


AMB DISSOLVENT 7:3, ETANOL/AMONÍAC AL 30%
AMB DISSOLVENT: N-BUTANOL/ÀCID ACÈTIC GLACIAL/AIGUA (3:1:1)



Exemple de les distàncies A i B:
DISSOLVENT 7:3, ETANOL/AMONÍAC AL 30%
DISSOLVENT: N-BUTANOL/ÀCID ACÈTIC GLACIAL/AIGUA (3:1:1)
Leucina
Rf = 5,8
7,8
Rf= 0,74
Leucina
Rf =3,5
6,5
Rf= 0,54
Glicina
Rf = 3,3
7,8
Rf= 0,42
Glicina
Rf = 1,7
6,5
Rf= 0,26
Fenilalanina
Rf = 6,2
7,8
Rf= 0,79
Fenilalanina
Rf = 3,6
6,5
Rf= 0,55
Lisina
Rf = 2
7,8
Rf= 0,25
Lisina
Rf = 0,6
6,5
Rf= 0,09
Mostra problema
Rf = 5,1
7,8
Rf= 2,2
7,8
Rf= 0,65 i Rf= 0,28
Mostraproblema
Rf = 3,4
6,5
Rf= 0,52


A la mostra problema, utilitzant el dissolvent 7:3, etanol/amoníac al 30%, trobem una m
mescla de dos aminoàcids: leucina i lisina.
A la mostra problema utilitzada en la comparativa, dissolvent n-butanol/àcid acètic glacial/aigua (3:1:1), trobem unaminoàcid: leucina.


Aminoàcids amb radicals apolars alifàtics

Aminoàcids amb radicals aromàtics

Aminoàcids amb radicals carregats positivament (bàsics)
Glicina

La glicina té poca afinitat amb els dos dissolvents utilitzats.

Leucina

La leucina també te força afinitat amb el dissolvent 7:3. I també amb el dissolvent 3:1:1, tot i que no tanta.
Fenilalanina


Aquest aminoàcidés el que presenta més afinitat amb el dissolvent 7:3, etanol/amoníac al 30%.
En canvi presenta poca afinitat pel dissolvent n-butanol/àcid acètic glacial/aigua (3:1:1)
Lisina


Poca afinitat amb el dissolvent 7:3 i amb el 3:1:1


5. OBSERVACIONS I CONCLUSIONS

Observacions
Hem tornat a repetir el procediment de prendre la placa de silicagel, marcar la línia base a uns 15mm de la vora dela placa i dipositar les solucions de referència i de la mostra problema, donat que al agafar la mostra problema amb el capil·lar i posar-la a la placa, la gota que ha caigut ha sigut tan gran que ha ocupat el lloc del aa número 4, en aquest cas la Lisina.

Per entendre una mica el que s’ha dut a terme, expliquem el següent:
Els α-aminoàcids són les unitats estructurals de les proteïnes. Escaracteritzen per la presència sobre el mateix carboni (Cα) d'un grup bàsic (amino,-NH2 o-NH3 +) i un grup àcid (carboxil,-COOH o-COO-), a més d'una cadena lateral de naturalesa química molt diversa entre els 20 aminoàcids.
La cromatografia es defineix com la separació d'una barreja de dos o més compostos per
distribució entre dues fases immiscibles: una fase mòbil, que transporta les...