Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)


Universidad de Santiago de Chile
Facultad de Química y Biología
Química Analítica







INFORME DE LABORATORIO Nº6

Cromatografía líquida de alta resolución.

QuímicaAnalítica.


Introducción
La cromatografía es un método de físico de separación que se basa en la velocidad a la cuál distintas sustancias (fase móvil) se mueven a través de una fase estacionaria.En una cromatografía liquida de alta resolución el tamaño de las partículas de la fase estacionaria se ha disminuido hasta el tamaño de los micrones, con el objetivo de mejorar eficiencia de laseparación, por este motivo es necesario utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase móvil. (1) Cuando la composición de la fase móvil permanece constante se pueden realizar separacionesisocráticas, y si la composición de la fase móvil cambia durante el análisis se lleva a cabo una separación en gradiente. (2) En esta ocasión, se realizará una HPLC isocrática con una concentración de fasemóvil de agua y acetonitrilo 80:20 a través de la cual se determinará la concentración cafeína presente en una taza de té.

Objetivos
Objetivo general:
Conocer y manipular el equipo de HPLC
Objetivosespecíficos:
Preparar una curva de calibración que permita determinar la concentración de cafeína presente en la muestra problema.
Determinar la concentración de cafeína de una taza de té.Procedimiento experimental, materiales y métodos.
1. Preparación de la curva de calibración.
Preparar soluciones de 50, 100, 200, 300, y 500 ppm de cafeína a partir de una solución de 1000 ppm de cafeínaen matraces aforados de 50 mL, para ello ambientar y llenar una bureta de 25 mL con la solución 1000 ppm de cafeína. Determinar el volumen de solución 1000 ppm de cafeína necesario para preparar cadadisolución de la curva de calibración, verter el volumen correspondiente en el respectivo matraz aforados rotulado, rellenar con agua miliQ hasta el aforo. Inyectar una alícuota de cada solución...