Cromatografía De Gases Y De Líquidos De Alta Resolución

CROMATOGRAFÍA DE GASES Y DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN

TEMA VIII
CURSO DE POSTGRADO

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Cromatografía postgrado. JAP

TEMA VIII Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR). Cromatografía Líquida clásica. Ventajas de la utilización de la alta presión. Parámetros en CLAR. Tipos de CLAR. Polaridad y retención. Ionización en CLAR: par iónico. Diferencias con la Cromatografía de gases.2
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Cromatografía líquida clásica. La cromatografía líquida desarrollada en columna por gravedad es la técnica que dio origen por transformaciones y mejoras sucesivas a la actual CLAR. Aquella técnica se empleaba con dos objetivos: la separación de los componentes de una mezcla o la purificación de un producto con pequeñas cantidades de impurezas, utilidad, éstaúltima, que todavía hoy se practica en los laboratorios.

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ORÍGENES DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

Bombeo por presión hidrostática
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DESCRIPCIÓN : • • • • • • • • • • • • Tubos cilíndricos huecos de capacidad variable. Tediosa y delicada preparación. Difícil depósito de la muestra y recuperación de productos. Empleo departículas de 50 a 200 micras. Proceso muy lento y laborioso. Baja reproducibilidad. Flujo variable al ser controlado sólo por gravedad. Dificultades en Absorción por fenómenos de arrastre. Eficacia y resolución bajas. Equipo sencillo. Coste reducido. Útil en todas las escalas: analítica, preparativa e industrial.
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INCONVENIENTES :

VENTAJAS :

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ORÍGENES DE LACROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

TO EN T IN

A OR J ME DE

Bombeo por aplicación de vacío
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ORÍGENES DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

INTENTO DE MEJORA

Bombeo por aplicación de presión con nitrógeno
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ORÍGENES DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

O NT E NT I

DE

A OR EJ M

Bombeo mediante bomba peristáltica
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PASO DEL PROCESO CLÁSICO A LA ALTA RESOLUCIÓN La lentitud del proceso se remedió con el empleo de una bomba de alta presión que controla con exactitud el flujo deseado. La dificultad de desarrollar procesos de absorción, un factor limitante de primera magnitud al ser de cierta polaridad muchos compuestos orgánicos, se solucionó con la innovación de las fases químicamente enlazadas sobregel de sílice que permiten una amplia gama de polaridades al tiempo que ofrecen una resistencia física total al arrastre. La baja eficacia se solventa disminuyendo importantemente el tamaño de partícula, cosa que no se pudo ensayar hasta que no se dispuso de una potente bomba que venciese la bajísima permeabilidad que el compacto empaquetamiento de partículas tan pequeñas confiere a la columna.Sumando estos efectos, resulta que el paso de caída por gravedad a alta presión repercute muy positivamente en un cambio en la capacidad de resolución de las columnas de baja a muy alta.
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Ventajas de la utilización de la Alta Presión. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Columnas reutilizables. Trabajo posible en todas las escalas. Rellenos con tamaño departícula de 3 a 10 micras. Variedad disponible de polaridades en fases estacionarias. Flujo constante controlado por la bomba. Pequeña cantidad de muestra y de fácil inyección. Análisis muy rápidos. Alta eficacia y alta resolución. Alta reproducibilidad al estar las condiciones controladas. Utilizable adsorción, absorción y otros sistemas. Existencia de detectores continuos, sensibles y variados.
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Parámetros en CLAR. Los parámetros cromatográficos estudiados anteriormente en los capítulos de Cromatografía de Gases son aplicables, con las adaptaciones propias del cambio del tipo de fase móvil, a la Cromatografía de Líquidos. Conceptos como resolución, número de platos, tiempo de retención, retención relativa, factor capacidad, ecuación de van Deemter,...