Cromatografia De Liquidos De Alta Resolucion

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN

La cromatografía de líquidos de alta resolucion comenzó a desarrollarse en los años 1960, aumentando su importancia en las décadas siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica más empleada. Sin embargo esto se irá modificando con el paso de los años.
La cromatografía es un método físico o de separación para la caracterización demezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física.
La cromatografía de liquidos de alta resolucion o High perfomance liquid chromatography (HPLC) es un tipo de cromatografía en la que se utiliza una fase móvil líquida y una fase estacionaria muy finamente dividida. Para lograr una velocidad de flujo satisfactoria, el líquido debe someterse a una presión decientos de libras por pulgada
El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.
En las primeras etapas del desarrollo de la cromatografía de líquidos, los
científicos se dieron cuenta de que se podían conseguir grandes aumentos en la eficacia de la columnadisminuyendo el tamaño de las partículas de los rellenos. Sin embargo, no fue sino hasta finales de los años sesenta cuando se desarrolló la tecnología adecuada
para producir y utilizar rellenos de tamaño de partícula del orden de los 3 o 10 μm. Esta tecnología requiere una instrumentación sofisticada, que contrasta con las simples columnas de vidrio de la cromatografía de líquidos clásica. Paradistinguir estos procedimientos más nuevos de los métodos básicos, que todavía se utilizan con fines preparativos, se emplea la denominación de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).
Es incuestionable que la cromatografía de líquidos de alta resolución es la écnica de separación más ampliamente utilizada, con unas ventas anuales de equipos de HPLC que se aproximan a la cifra decientos de miles de millones de pesetas. Las razones de la popularidad de esta técnica son su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial interés en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general.Algunos ejemplos de estos materiales incluyen los aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, drogas, terpenoides, plaguicidas, antibióticos esteroides, especies organometálicas y una cierta variedad de sustancias
inorgánicas.

CARATERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES
Aplicaciones principales: Técnica de separación para los materiales menos volátiles e iónicos; análisiscuantitativo de multicomponentes.
Fenómeno molecular: Reparto entre una solución líquida y un substrato
Ventajas en el análisis cualitativo: Separa materiales para su examen por medio de otras técnicas.
Ventajas en el análisis cuantitativo: Aplicación amplia a los materiales menos volátiles, análisis de multicomponentes.
Muestra promedio deseable: 10 mg
Limitaciones del método: Se tarda endesarrollar el método
Limitaciones para la muestra: Ninguna


INSTRUMENTACIÓN
El instrumento de HPLC consta de un sistema de suministro de disolvente, válvula de inyección de muestra, una columna de alta presión, un detector, y un ordenador para controlar el equipo y visualizar los resultados
Algunos equipos incluyen además un horno para controlar la temperatura de la columna.
„ Sistemas para eltratamiento de los disolventes.
Filtrado.
Desgasificadores.
Elución isocrática
Utiliza una fase móvil de composición constante
Elución en gradiente
Dos o mas disolventes de polaridad distinta cuya relación cambia a lo largo de la elución cromatográfica







RECIPIENTES PARA LA FASE MÓVIL
Un aparato moderno de HPLC se equipa con uno o más recipientes de vidrio o
de acero...