Cuantificación de Proteínas. Método de biuret



Informe Nº 4
“Cuantificación de Proteínas. Método de biuret”








Integrantes: Docente:
Castro Carlos Jeldres Oscar
Córdova Yerko RamírezSebastián
Vega Martin

Introducción:
Según Martínez, P. (2000): El reactivo de biuret es usado para detectar la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con 2 o más enlaces peptídicos. Los reactivos de Biuret producen un complejo de color purpura al reaccionar con una solución alcalina de sulfato de cobre. Los iones cúpricos forman un complejo de coordinación con los pares deelectrones no compartidos del N, presente en los aminoácidos de las proteínas.
Según Harris, D. (2003): Un espectrofotómetro es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de radiación electromagnética (REM), comúnmente denominado luz, separándolo en la identificación, calificación y cuantificación de su energía. Su eficiencia, resolución, sensibilidad y rango espectral dependerán de lasvariables de diseño y de la selección de los componentes ópticos que lo forman. Entre sus partes destacan la fuente de luz, monocromador y fotodetectores.
Objetivos:
Funcionamiento práctico del espectrofotómetro.
Determinar la concentración de proteínas en las distintas soluciones.
Cuantificar las proteínas a través del método Biuret.
Procedimiento experimental:
Utilizando una micropipeta de 1 mL.. se midieron 2,0 mL. de NaCl 0,9% p/v y se introdujeon al primer tubo de ensayo. Luego para el segundo tubo de ensayo se agregaron 1,8 mL. de NaCl 0,9% p/v y 0,2 mL de SAB 5 mg/mL. Al tercer tubo de ensayo se le agregaron 1,5 mL NaCl 0,9% p/v y 0,5mL de SAB 5 mg/mL. Para el cuarto tubo de ensayo se agregaron 1,0 mL de NaCl 0,9% p/v y 1,0 mL. de SAB 5 mg/mL. En el quinto tubo deensayo se agregaron 0,5 mL. de NaCl 0,9% p/v más 1,5 mL. de SAB 5 mg/mL. y por último al sexto tubo de ensayo solo se le incorporó 2,0 mL. de SAB 5 mg/mL.
En los otros dos tubos de ensayo restantes se les incorporó muestras problemas distintas. Al séptimo tubo de ensayo (MP1) se le agregó orina diluida a 1:10 v/v con NaCl 0,9% p/v y al octavo tubo de ensayo (MP2) seroalbúmina de bovinadiluida al 1:80 v/v con NaCl 0,9% p/v.
Ya llenados con las soluciones respectivas, a los tubos de ensayo se les agregó 2,0 mL de Reactivo de Biuret con la micro pipeta para luego ingresar las muestras al Espectrofotómetro UV- Visible y así obtener la absorbancia de cada una de las muestras.
Resultados:
Se obtuvieron diversos valores de absorbancia y concentraciones para cada muestra, las que fueronregistradas en una tabla de datos (anexos, Tabla 1). Las concentraciones se pudieron obtener por medio de cálculos (anexos, cálculos, c). Las concentraciones de proteínas de la orina y la seroalbumina de bovino se determinaron gracias a la ecuación de la recta obtenida del grafico (anexos, grafico 1) y sus respectivos cálculos (anexos, cálculos, a; anexos, cálculos, b).

Discusión:
Se utilizócubetas de plástico debido al rango de clasificación de longitud de onda que posee (380nm – 780nm), ya que las proteínas no superan ese rango, siendo la más alta contenida en las proteínas del grupo prostético hemo, como la hemoglobina con una longitud de onda de 600nm, obteniendo una resultado más preciso.
Gracias a los datos obtenidos (anexos, tabla 1) se pudo confeccionar un gráfico (anexos,grafico 1) siendo el suero fisiológico la muestra blanco, y obtener la ecuación lineal de este para así determinar la concentración de proteínas presentes en la orina y en una solución de seroalbumina de bovina. De acuerdo a los cálculos ya mencionados en los resultados se obtuvo una concentración de proteínas en la orina de 0,52 mg/mL y una concentración de seroalbumina de bovina de 158,4 mg/mL....