Cultivo y aislamiento

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CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Marcela alvira

RESUMEN

Gran parte de los estudios en microbiología depende de la capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un laboratorio, y esto es sólo posible si se dispone de los medios de cultivo adecuados; los medios especiales son imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos; en esta práctica de laboratorio,vamos a conocer los métodos más utilizados para el aislamiento y el cultivo de bacterias, la composición y el uso de los diferentes medios de cultivo y diferenciar las características de crecimiento de las bacterias según el medio de cultivo utilizado.

INTRODUCCIÓN

Para obtener energía y elaborar nuevos componentes celulares, los organismos tienen que disponer de materias primas o nutrientes;los nutrientes son sustancias que se emplean en la biosíntesis y producción de energía, y por consecuencia, son necesarios para el crecimiento microbiano; además de los nutrientes, los factores ambientales como la temperatura, nivel de oxígeno, concentración osmótica y otros, del medio son críticos para cultivar con éxito los microorganismos.

Para el cultivo y el aislamiento de las bacterias,los medios de cultivo se pueden elaborar completamente a partir de componentes definidos químicamente (medios definidos o sintéticos) o pueden contener constituyentes como peptonas y extracto de levadura, cuya composición exacta se desconoce (medios complejos).

Los medios de cultivo, según su consistencia, pueden ser sólidos, semi-sólidos y líquidos; un medio de cultivo se puede solidificarañadiéndole agar, polisacárido complejo producido por algas rojas.

Los medios de cultivo se clasifican según su función y composición en medios con fines generales, enriquecidos, selectivos y diferenciales.

Los cultivos puros se pueden obtener normalmente aislando células individuales con cualquiera de las tres técnicas de siembra en placa; por extensión, en estrías y en profundidad.
MATERIALESY METODOS

1. Cultivo en placa de agar:

A. Método Francés: se flamea el asa y se toma la muestra a inocular. En el medio de cultivo indicado se extiende el cultivo haciendo cuatro o cinco estrías paralelas, sin romper el agar. Se flamea el asa, y sin tomar más muestra, se hacen nuevamente cinco o cuatro estrías paralelas formando un ángulo recto con las anteriores estrías. Este paso serepite hasta cubrir toda el área de la caja de petri.

Con este método se van a inocular los siguientes microorganismos:

Agar EMD: E-coli
Agar Manitol-sal: Cultivos Staphylococus aureus
Agar nutritivo: Cultivo Bacillus cereus o sibtilis

B. Método clásico: flamear el asa y tomar la muestra del material a estudiar. Colocar el inóculo en uno de los extremos de la caja de petri quecontiene uno de los medios a utilizar. Extender de un extremo a otra formando líneas en zig-zag hasta cubrir toda el área de la caja.

Para este caso, como la muestra se va a tomar de la garganta, no se utiliza el asa sino un escobillón.

Con este método se va a inocular el siguiente microorganismo:

Agar sangre: Streptococus

En esta parte de la práctica, se va a estudiar el patrón dehemólisis que es la capacidad de degradar la hemoglobina y se identifica si se forma un halo alrededor de la colonia.

2. Cultivo en agar inclinado: flamear el asa de inoculación con la mano derecha; en la mano izquierda sostener el tubo con el cultivo y remover con el dedo meñique de la mano derecha el tapón del tubo; flamear la boca del tubo y con el asa tomar una pequeña porción de la colonia.Flamear nuevamente la boca del tubo, taparlo y colocarlo en la gradilla. Tomar el tubo a inocular, destapar, flamear e inocular haciendo una estría en la superficie en línea recta. Flamear nuevamente la boca del tubo, tapar se lleva a incubar por 24 horas a 37°C. Describir las características del crecimiento microbiano.
Con este método se inocula cualquier cepa.

3. Cultivo en Caldo...
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