Métodos de cultivo y aislamiento de bacterias

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PRÁCTICA No. 4
Métodos de cultivo y aislamiento de bacterias

Objetivos. Que el alumno conozca las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para la obtención de cultivos puros de bacterias. Que el estudiante prepare medios de cultivos de uso general, diferenciales y selectivos para el cultivo de diferentes especies bacterianas.

Introducción
Las bacterias debenser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Un medio de cultivo es una solución acuosa de diferentes compuestos que contiene todos los elementos indispensables que requieren los microorganismos para crecer.

Generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios líquidos(caldos) o solidificados con agar para su propagación y/o conservación, así como para estudiar sus características de crecimiento. Es importante recordar que la inoculación de los microorganismos en los medios de cultivo, siempre deberán realizarse en zona aséptica (cerca del mechero o en campana de flujo laminar), condiciones que limitan la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes.Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de microorganismos a partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad microbiana, así como para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos. Los cultivos puros están formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables para conocer las características morfológicas, propiedades detinción, actividad bioquímica, patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.

El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por métodos de dilución, en medios sólidos por estría en placa o en medios líquidos. En el primer caso se considera que cada célula bacteriana que se separa dará origen a una población que formará una coloniacaracterística, visible a simple vista.

La limitación principal de estas técnicas de dilución, es que no es práctica para el aislamiento a partir de mezclas donde el microorganismo de interés se encuentra en pequeñas cantidades, donde solamente se obtendrán las bacterias dominantes.

Para favorecer el aislamiento de cultivos de baja intensidad, se aplican métodos de cultivo especiales, en los que seutilizan medios que contienen nutrientes especiales, antibióticos, altas concentraciones de sales y/o condiciones de pH, luz o temperatura para favorecer el crecimiento de microorganismo de interés y se conocen como selectivos o de enriquecimiento.

En ocasiones se pueden agregar a los medios de cultivo otros componentes como: sangre, colorantes, indicadores, etc. Para distinguir especiesbacterianas diferentes por la forma en que metabolizan los sustratos que se manifiesta por cambios en la apariencia o modificación del pH del medio de cultivo. Estos medios se conocen como medos diferenciales y son de gran utilidad para la caracterización e identificación de especies bacterianas.

Materiales
3 cajas de Petri con Agar nutritivo (anexo 2.2)
2 cajas de Petri con Agar de eosinaazul de metileno EMB (Anexo 2.3)
2 cajas de Petri con Agar Mac Conkey.
2 cajas de Petri con Agar MM.
1 Mechero
1 Asa de inoculación
1 Parrilla de agitación
1 Autoclave

Procedimiento

El alumno preparará los medios de cultivo y llenara las cajas petri para posteriormente inocular sus muestras.


Técnica de estría cruzada
a) En la parte posterior y exterior de lacaja, dividirla en cuatro cuadrantes. Tomar una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocular la muestra haciendo 4-5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la caja, cerrar la caja (Figura 4).
b) Flamear el asa de inoculación y hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta. Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la...
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