cultivos

INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR
El cultivo de tejidos ha sido considerado durante mucho tiempo como una mezcla de
ciencia y arte. Inicialmente fue considerada inicialmente como una técnica
particularmente difícil de aprender. Sin embargo, hoy en día estas dificultades están
superadas gracias a factores como los medios de composición definida, la
disponibilidad de antibióticos, lasinstalaciones asépticas (salas de cultivo limpias,
cabinas de flujo laminar, incubadores estériles, etc), dispositivos de cultivo (botellas con
tapones filtrantes, placas de Petri ventiladas, etc).

1.- Introducción histórica
El cultivo de tejidos se desarrolló a partir de los últimos años del siglo XIX como una
continuación de las técnicas de la embriología. Wilhem Roux mantuvo en el año 1885células de embrión de pollo en solución salina durante unos días. Se considera al
zoólogo americano R. G. Harrison como el iniciador de los cultivos de tejidos animales.
En 1907, Harrison fué el primer científico que empleó técnicas in vitro para el estudio
de fenómenos in vivo, realizando cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios.
Pudo observar el crecimiento de los axones de losneuroblastos, y estableció que el axón
se formaba por expansión a partir del cuerpo neuronal y no por fusión de una cadena de
células. El cultivo se realizaba en una gota de linfa del anfibio que colgaba de un
cubreobjetos sobre una cámara sellada.
La primera limitación para el establecimiento de cultivos era lograr un medio
nutritivo adecuado. Burrows (1910) empleó plasma de pollo para nutrir losexplantes
de tejidos embrionarios de pollo. Este medio se reveló mucho mejor que los
anteriormente probados, lo que le permitió observar el crecimiento del tejido nervioso,
corazón y piel.
Burrows y Carrel demostraron que la vida del cultivo se puede prolongar mediante
subcultivo. Los medios empleados fueron plasma suplementado con extractos de
embrión.
Rous y Jones (1916) emplearon por vezprimera extractos enriquecidos en tripsina para
disociar las células de embriones de pollo, estableciendo el primer cultivo celular.
Uno de los mayores problemas que describen para el establecimiento de los cultivos
celulares es la aparición de múltiples contaminaciones, por lo que desarrollaron
numerosos métodos de manipulación en condiciones de asepsia que aún hoy día se
utilizan.
En 1913Carrel demostró la posibilidad de mantener en cultivo células extraídas de un
animal, embrión de pollo, durante un periodo de tiempo superior al de la vida de éste.
Mantuvo en cultivo células de pollo durante 34 años. Gran parte del éxito en el
mantenimiento de los cultivos se debió al desarrollo del denominado frasco de Carrel.
Entre los años 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategiasde obtención de
cultivos y de mantenimiento de las condiciones estériles, pero sin grandes avances. A
partir de los años 40, con el aislamiento de los primeros antibióticos, se desarrollaron
numerosas aplicaciones.

En 1948, Earle y col. aislaron células de la línea celular L y mostraron que eran
capaces de formar clones en el cultivo de tejidos. Demostraron que para que una célula
llegue adividirse necesita ser alimentada con los nutrientes correctos.
En 1952, Gry y col. establecen la primera línea celular continua, las células HeLa. El
medio empleado era extremadamente complejo y poco definido: plasma de pollo,
extracto de embrión bovino y suero de cordón umbilical humano.
En 1954, Rita Levi-Montalcini y col. establecen que el factor de crecimiento nervioso
estimula elcrecimiento de los axones en tejidos en cultivo. Este trabajo supuso el
Premio Nobel para Levi-Montalcini en 1986.
En 1955, Eagle realiza la primera investigación sistemática de los requerimientos
nutritivos de las células en cultivo.
En 1961, Hayflick y Moorhead establecieron que la duración de los cultivos de
fibroblastos era finita: podían mantener estos cultivos durante 12 pases. No...