curva de calibracion de proteina

INTRODUCCIÓN
¿Qué se entiende por curva de calibración?
Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia (por ejemplo la albúmina sérica bovina) que seutiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (proteínas) presente en una muestra incógnita.
En muchas determinaciones se cumple una relación proporcional entre la magnitud o intensidad de color queda una reacción y la cantidad del reactivo que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de proteínas en una solución genera la aparición de un color azul pálido cuando es agregada a unamezcla reactiva, la presencia de 20 ug de proteína dará lugar a que la solución se torne azul más oscuro y así sucesivamente.
Método de Biuret
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreadoformado por la condensación de dos moléculas de urea con eliminación de amoníaco. Reacción del Biuret Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico (CuSO4) se añade a una solución de proteínase forma una complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración violeta-púrpura, que presenta un máximo de absorción a 540 nm. Las características más importantesde la reacción son: · La reacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los péptidos y proteínas. · Su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml. · No depende de la composición deaminoácidos. · Algunos compuestos (NH4 +, Tris, etc.) dan la reacción. Violeta-púrpura Complejo proteína-Cu(II)

PROCEDIMIENTO
Materiales
Reactivos:
o Solución estándar de albúmina 10 mg/mlo Reactivo de Biuret (solución de sulfato de cobre 1% en NaOH 14%)
 Muestra proteica
Vaso de precipitado de 100 ml
Pipeta parcial de vidrio de 2 ml
Vórtex
Reloj
Cubetas para espectrofotómetro
Gradilla paracubetas
Micropipeta de 100-1000 ml
Agua destilada
Espectrofótometro
Método
Al comenzar nuestro trabajo debemos recordar la manera de usar las micropipetas, ya que solo unos microlitos de error nos...