Curvas de calibración

PRACTICA No.2: Ley de Beer‐Lambert II1. 
 Curvas de Calibración y Método Estadístico de Mínimos Cuadrados. 
 
Palabras Clave: Curva de Calibración, Blanco Analítico, Método de Mínimos Cuadrados, Coeficiente de Correlación Lineal. 

 
Introducción: 
La  gran  mayoría  de  métodos  instrumentales  requieren  una  calibración,  proceso  que 
relaciona  la  señal  analítica  medida  con  la concentración  del  analito.  Los  tres  métodos  más 
frecuentemente utilizados son: la realización y el uso de una curva de calibración, el método de 
la adición estándar y el del patrón interno1.   
Para  realizar  el  Método  de  la  Curva  de  Calibración  se  procede  a  realizar  una  serie  de soluciones de concentración conocida de analito, los cuales se introducen en el instrumento y se 
registra la señal instrumental. Normalmente esta señal se corrige por medio de la señal de un 
Blanco Analítico en el que se establece el cero de absorbancia, este blanco contiene todos los 
componentes  de  la  matriz  del  análisis  (Ejemplo:  agua  destilada,  agua/etanol)  a  excepción  del 
analito que se desea medir. El blanco es preparado en el instante en que se preparan las demás muestras a determinarse ya debe imitar las condiciones de análisis a las que se cometen éstas 
últimas. 
 
Fundamento: 
La  absorción  de  la  luz  por  una  solución  diluida,  viene  dada  por  la  ley  de  Beer,  que 
relaciona la concentración de la fase absorbente con la radiación. La relación entre la absorción de la luz y el camino recorrido por ésta (o sea, el espesor de la cubeta, viene dado por las leyes 
de  Lambert.  La  fusión  de  estas  leyes  empíricas  nos  da  la  absorbancia  total  por  un  cuerpo, 
cuando interacciona con un haz  monocromado.  
Mediante un método que obedezca la ley de Beer‐Lambert se puede realizar un análisis 
cualitativo  de  cualquier  especie  en  solución,  conociendo  por  supuesto  la  longitud  de  onda  de 
máxima  absorbancia  del  analito,  esto  por  medio de  la  determinación  de  la  absorbancia  en 
función  de  soluciones  de  concentración  conocida  a  través  de  la  elaboración  de  una  curva  de 
calibración que las relacione de manera proporcional y linealmente, para lo que se requiere de 
un método estadístico. El método estadístico clásico y que se adecua a las características para la realización de dicha actividad es el de los Mínimos Cuadrados en los que se grafica la ordenada 
(la  variable  independiente)  con  los  datos  de  la  respuesta  del  aparato  y    la  abscisa  (variable 
dependiente)  en  donde  se  coloca  la  concentración  o  el  tanto  por  ciento  del  analito,  lo  más 
habitual (y deseable) es que la gráfica se aproxime a una línea recta, sin embargo puede darse el 
caso  de  que  los  valores  no coincidan  en  una  recta  debido  a  errores  aleatorios  del  proceso  de 
medida,  el  método  de  los  mínimos  cuadrados  nos  sirve  para  intentar  ajustar  la  “mejor”  línea 
recta  que  conecte  los  puntos.  La  ecuación  canónica  de  la  recta  se  expresa  matemáticamente 
como:  
Y = mx + b 
y  en  el  método  de  mínimos  cuadrados  estos  valores  se  obtienen  realizando  las siguientes 
operaciones manuales: 
m = 

          y,       b = 
 

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Elaborada por Jorge Reyes y William Quiroa.

 

 
Donde n, indica el número de datos y ∑ las sumatorias correspondientes de los términos 
tabulados. Esto se simplifica con el uso de calculadoras científicas en cuyas opciones estadísticas se encuentra por lo regular la opción de calculo de regresión lineal, al igual que en programas de 
ordenador como Exel y otras hojas electrónicas. La viabilidad del método de curva de calibración 
queda establecida por el valor del cuadrado del Coeficiente de Correlación Lineal (r2), que debe 
ser superior a 0.998, para realizar un estudio cualitativo adecuado. 
 
 
Objetivos 
1. Elaborar  una  curva  de  calibración ...