Desarrollo De Un Lote Alimentado Aireado

CULTIVO LOTE ALIMENTADO AIREADO




I. OBJETIVOS:



Objetivos generales:


▪ Diseñar y realizar una experiencia de cultivo celular por lote alimentado (CLA) con alimentación constante utilizando una cepa de Saccharomyces cerevisiae ATCC-4126.


Objetivos específicos:




Las actividades de la experiencia deben incluir:

▪ Diseño del medio de cultivo
▪Activación celular y desarrollo del inoculo.
▪ Identificar y describir las partes, accesorio y geometría, conociendo la operación del fermentador, esterilización, carga y descarga y toma de muestras.
▪ Identificar en el fermentador los instrumentos de medición y control automático, así como la calibración de los sensores.
▪ Puesta en marcha del CLA. En el cultivo por lote determinar µMAX yYX/S
▪ Obtener los perfiles de masa celular, fuente de carbono y oxigeno disuelto a través del tiempo de operación.
▪ Observar las zonas de crecimiento exponencial y limitado.
▪ Determinar YX/S y QX del CLA.
















II. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL :





COMPOSICION DE MEDIOS DE MANTENCION, ACTIVACION Y FERMENTACION PARA SACCHAROMYCES CEREVISIAE ATCC-4126❖ Medio sólido de mantención


Tabla 1: concentración de nutrientes para el medio de mantención (50ml)


|Nutrientes |So |So |
| |(g/l) |(g/50ml) |
|Extracto de Levadura |3|0.15 |
|Extracto de malta |3 |0.15 |
|Peptona |5 |0.25 |
|Agar |20 |1.00 |
| Glucosa | 10|0.5 |


1. De acuerdo a la tabla pesar los nutrientes, en una balanza analítica
2. Luego se procediera a diluir los compuestos en 50 ml de agua destilada, en matraz de 250 ml.
3. Se llevara al mechero hasta alcanzar la ebullición 1 a 2 minutos, todo esto se mantiene en constante agitación.
4. Preparar 6 tubos de ensayo con tapa y en caliente seextrae 6-7 ml del preparado con la ayuda de una pipeta de 10 ml, e inmediatamente taparlos
5. Posteriormente esterilizar los tubos en la autoclave durante 15 minutos a 121°C.
6. Una vez finalizada la esterilización se coloca en posición inclinada y se deja en a temperatura ambiente.


















Tabla Nº 2: Composición de medio de Activación (para 15 ml desolución)



|Nutriente |Concentración (g/l) |
|Sacarosa |15 |
|Extracto de Levadura |3 |
|Extracto de Malta |5 |
|Solución de Sales |5 ml/L |Composición de las Sales:

|Solución de sales 5mL/L | |
|[pic] |1.12 |
|[pic] |0.11 |
|FeSO4. 7H2O |0.06 |
|NaCl|0.28 |
|CuSO4. 5H2O |0.05 |
|CoCl2.6H2O |0.01 |
|[pic] |0.0005 |
|[pic] |0.027 |


Shaker
Temperatura = 35C
Velocidad de Agitación = 200 rpm...