Determinacio de coliformes totals i fecal

Determinació de coliformes totals i fecals 
 
 
Fonaments teòric: 
 
En  els  aliments hi ha presencia de microorganismes que produeixen procesos de fermentació 
dels   aliments,   entre  d’altres,  encara  que  també  es  troben  de  forma  natural.  Pot  haber 
presència  de  microorganismes  inofensius  per  les  persones,  però  hi  ha  d’altres  que  poden 
provocar  malalties,  aquests últims  són els  anomenats  patògens  dels  quals  volem determinar 
la  seva  presència,  és  a  dir,  detectar  si  els  sucs  estan  contaminats  per  microorganismes. 
Aquesta  contaminació  ve  donada  per  manipulació  de les persones en la seva producció i per 
microorganismes ambientals. Per això, és important considerar la seva presencia i determinar si estan presents realitzant un anàlisi bacteriològic. 
 
Els  microorganismes  patògens  tenen  una  detecció  molt   lenta  i  complicada,  a  amés  a  més 
dels   elevats  costos,  degut  a  que  solen  presentar  baixa  proporció,  hi  ha  una  distribució 
irregular,  es  necessiten  volums  molt elevats,  etc.  Per això es realitza  un anàlisis en busca de 
microorganismes  ​
indicadors​
.  Aquests  microorganismes tenen  una  detecció i  recompte  més 
ràpid  i  senzills  que  els  patògens,  i  solen  ser  microorganismes  indicadors  de  contaminació 
fecal, el  que ens indica que probablement també hi pot haver­hi patògens. Aquests indicadors 
són: bacteris aerobis, bacteris coliformes, estrepctococs fecals i clostridis sulfito­reductors. 
 
La  denominació  genèrica  coliformes  designa  un  grup  d'espècies  bacterianes que  tenen 
certes  característiques  bioquímiques  en  comú  i  importància  rellevant  com  indicadors  de 
contaminació de l'aigua i els aliments. 
 
El  grup  dels  coliformes  inclou  les  següents  propietats  bioquímiques:  oxidasa  negatiu  i 
capacitat  de  fermentar  lactosa,  amb  producció  de   gas  a  48  hores  a una temperatura  de  37 
°C. 
 
Els  bacteris  coliformes  fecals  formen part  del  total  del  grup  coliforme.  Són   definides  com 
bacils  Gram  ­,  no  esporulats que fermenten la lactosa amb producció d'àcid i gas a 44°C dins  
de 24 hores. 
 
Objectiu: 
 
Determinar el nombre més probable de coliformes totals i fecals en els sucs de marca 
comercial Don Simon i Hacendado. I amb les proves IMViC determinar el gènere de cada una de les colònies de coliformes totals trobades a les plaques de la prova confirmativa en el cas 
de que hi hagi presència. 
 
 

 
Material i reactius: 
● Flascó 
● Vas de precipitats 
● Balança 
● Medi de culiu: Brou lactosat: 13g/L 
● Medi de culiu: Agar EMB: 37,5g/L 
● Medi de culiu: Agar brou verd­brillant al 2% de bilis: 40g/L 
● Campana Durham 
● Espàtula  
● Agitador magnètic 
● Calefactor 
● Erlenmeyer de polipropilé 
●Paper indicador 
● Autoclau 
● Estufa de cultiu 
● Pipeta 
● Pipum 
● Bunsen 
 
Procediment: 
 
Preparació de medi de cultiu Brou Lactosat (Lactosa Broth): 
­  Dissoldre   el  brou  (1,56gr)  amb  els  60ml  d’aigua  en  un  got  de  precipitats,  per  fer la 
preparació a concentració doble. 
­  Dissoldre  el  brou  (1,82gr)  amb  els  140ml  d’aigua  en  un  got  de  precipitats,  per  fer la preparació a concentració simple. 
­  Posar  cada  got  de  precipitats  en  un  calefactor  /  agitador  magnètic  fins  que  quedi 
homogeni totalment. 
­ Distribuir 10ml de brou a concentració doble en els 3 primers tubs de cada grup. 
­ Distribuir 10ml de brou a concentració simple en el 6 (+1 de control) tubs restants per 
a cada grup. 
­  Enroscar  tots  els  tubs  deixant  mitja  rosca desenroscada  per  facilitat  l’esterilització  a 
l’interior del tub i posar paper indicador. 
­ Autoclavar els tubs ficats en una gradeta durant 20min a 120ºC. 
 
Preparació de medi de cultiu Brou verd­brillant al 2% de bilis: 
­ Dissoldre el brou (2,8gr) amb els 70ml d’aigua en un got de precipitats. 
­ Posar el got de precipitat en un calefactor / agitador magnètic fins que quedi ...