Determinacion De Concentracion De Proteinas Por El Metodo De Biuret

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEINAS
METODO DE BIURET
¿En qué consiste la reacción del Biuret?

El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por
la condensación de dosmoléculas de urea con eliminación de amoníaco.

Reacción del Biuret
Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico (CuSO 4) se añade
a una solución de proteína se forma una complejo entre elion cúprico y
los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración violeta-púrpura,
que presenta un máximo de absorción a 540 nm.

Las características más importantes de la reacción son:
· Lareacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los
péptidos y proteínas.
· Su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml.
· No depende de la composición de aminoácidos.
·Algunos compuestos (NH4+, Tris, etc.) dan la reacción.

Violeta-púrpura
Complejo proteína-Cu(II)

El espectrofotómetro que se va a manejar en la práctica es del tipo
convencional de haz simple. Unesquema del mismo se presenta a
continuación:

Esquema de un espectrofotómetro convencional de haz simple
· Se enciende el espectrofotómetro y se ajusta la longitud de onda del
espectrofotómetroa 540 nm.
· Se colocan en una gradilla ocho tubos de ensayo que deben de estar
limpios y secos.
· Se numeran del 1 al 8 con un rotulador permanente al agua.

· Con las micropipetas adecuadas alvolumen a medir, se adiciona a
cada uno de ellos los volúmenes de la disolución patrón de albúmina
de suero bovino (BSA) y de agua destilada que se indican en la
siguiente Tabla:

Tubo
(nº)
12
3
4
5
6
7
8

Albúmina
patrón
(mL)
0
0 ,1
0 ,2
0 ,3
0 ,4
0.5
0.6

Agua
(mL)

Problema
(ml)

2,0
1 ,9
1 ,8
1 ,7
1 ,6
1 ,5
1.4
2.0

A cada uno de los tubos de ensayose añaden 2 mL de reactivo de
Biuret, se tapa con papel parafilm y se invierte dos o tres veces para
mezclar
Se toma la gradilla con los tubos de ensayo y se introduce en el baño
de agua...