Determinacion de dna

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INTRODUCCIÓN:

Las bacterias, al igual que los organismos eucariotas poseen los dos tipos de ácidos nucleicos: DNA, componente de su único cromosoma, y los diferentes ácidos ribonucleicos (RNAr, RNAt, RNAm). Además, las bacterias también tienen cierta cantidad extra de DNA que suele encontrarse circularizado y repetido varias veces, denominado DNA extracromosómico o DNA plasmídico y, aunquepuede no contener una información específica (plásmido críptico), normalmente codifica factores de resistencia a los antimicrobianos, como b-lactamasas, etc.

Los plásmidos son fragmentos extracromosómicos de ácidos nucleicos que aparecen en el citoplasma de algunos procariotas. Los plásmidos tienen una conformación variable que puede ser lineal, circular o con estructura superenrrollada.

Elcontrol de la replicación del plásmido depende del tipo de plásmido, existiendo plásmidos cuya replicación está acoplada con la replicación del cromosoma bacteriano y plásmidos cuya replicación no está relacionada con la del cromosoma. El tipo de genes que portan los plásmidos es variado, tratándose generalmente de genes que aportan ventajas adaptativas a la bacteria que los porta: genes deresistencia a antibióticos, genes de producción de sustancias tóxicas para otras bacterias o genes que codifican enzimas útiles para degradar sustancias químicas.

Los plásmidos son moléculas de DNA circular que se replican aparte del cromosoma bacteriano. El tamaño de los plásmidos bacterianos naturales oscila entre 5000 y 400000 pares de bases.

Bacteria DNA plasmídicoDNA cromosómico

DNA plasmídico

Los plásmidos son herramientas muy útiles en ingeniería genética para la transformación génica y la manipulación genética de procariotas y eucariotas. Los plásmidos empleados en ingeniería genética se llaman vectores. Son muy útiles para sintetizar en grandes cantidades proteínas de interés, como la insulina o los antibióticos, mediante un procedimiento conocidocomo transformación. Los plásmidos se pueden introducir en la célula bacteriana a través de un proceso llamado transformación. Para prepara las células para la incorporación del DNA, éstas deben de incubarse, junto al DNA, a 0°C, en una disolución de cloruro de calcio, posteriormente se someta un choque térmico. Las células tratadas de este modo, se vuelven competentes para introducir el DNA.Debido a que sólo una pocas células captan el DNA plasmídico, se hace un método selectivo. La estrategia es construir en el plásmido un gen que la célula huésped necesite para crecer bajo determinadas condiciones. Esto hace que la célula contenga un plásmido seleccionable, el gen se denomina marcador seleccionable.

Aunque los plásmidos no pueden sintetizar una envoltura proteica y se transfierencon dificultad de una célula a otra se ha hipotetizado que podrían ser los precursores de los primeros virus.

OBJETIVOS:

Se obtendrá DNA del plásmido pUC18.

Se realizará una electroforesis en gel de agarosa del plásmido obtenido y se discutirá lo obtenido.

RESULTADOS:

Se obtuvo el plásmido pUC18, a través de la incubación de la cepa en medio de cultivo LB a 37°C y con agitación todala noche. Y al medio se le agregó ampicilina como antibiótico para generar el gen marcador y seleccionar las células que desarrollaron el plásmido. Después de obtener las células transformadas con el plásmido, se prosiguió al aislamiento del DNA de las células.

El aislamiento se realizó a través de una desnaturalización de las células con una base fuerte y un surfactante, además del uso deenzimas y resuspensión en alcohol. Para seguir con la electroforesis en gel agarosa donde se obtuvo lo siguiente:

DISCUSIONES:

El aislamiento de DNA plasmidíco se realizó seleccionando unas células adecuadas, o competentes, que se les dio un tratamiento para transformarlas a través de un plásmido, o su DNA, que fue el pUC18, la selectividad de éstas células se debió a que el gen o marcador es...
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