EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE PROPIEDADES DE DNA EN LEVADURAS

Informe de laboratorio No.5 EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE PROPIEDADES
DE DNA EN LEVADURAS
Resumen
En esta práctica se estudió el comportamiento que tiene el DNA con cambios de temperatura y pH,
lo que nos expuso la desnaturalización del acido nucleico con los cambios de los factores
nombrados. También se calculo la pureza la cual arrojó un valor 2.2 fuera del rango, por lo tanto
nuestrasolución de ADN extraída poseía residuos.
Introducción
El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el
material genético que posee cada uno de los
seres vivos, y que los identifica y diferencia
unos de otros, en las células eucariotas, el
ADN está presente en el núcleo, así como en
mitocondrias y cloroplastos. En procariotas,
el ADN se encuentra en el citoplasma celular.
Es una molécula de longitudgigantesca, que
está formada por agregación de tres tipos de
sustancias: azúcares, llamados desoxirribosas,
el ácido fosfórico, y bases nitrogenadas de
cuatro tipos, la adenina, la guanina, la timina
y la citosina.
La estructura helicoidal del ADN se mantiene
gracias a interacciones no-covalentes. Por un
lado, el apilamiento entre las bases
adyacentes de una misma hebra favorece lasinteracciones hidrofóbicas entre éstas, y por
otro, cada base está unida a su pareja
mediante puentes de hidrógeno. La energía
libre de las interacciones no-covalentes que
mantienen la estructura helicoidal del ADN
no es muy superior a la energía de los
movimientos
térmicos
a
temperatura
ambiente, por lo que es posible desestabilizar
la estructura tridimensional del ADN
mediante un simpleaumento de la
temperatura.
Cuando se calienta un ADN de doble hebra
(forma nativa) se rompen las fuerzas de unión
entre las dos hebras y acaban por separarse.
Por tanto, el ADN desnaturalizado es de una
sola hebra. La transición entre el estado
nativo y el desnaturalizado, se conoce como
desnaturalización.
En
determinadas
condiciones, una disolución de ADN
monocatenario(desnaturalizado), puede
volver a formar el ADN nativo (de doble
hebra). Este proceso recibe el nombre de
renaturalización del ADN. Cuando el ADN

renaturalizado se forma a partir de moléculas
de ADN de distinto origen, o entre una
molécula de ADN y otra de ARN, la
renaturalización se conoce como hibridación.
El ADN también puede desnaturalizarse por
cambios en el pH y en la fuerza iónica que
afectenlas interacciones que mantienen la
estructura de la doble hélice.
La extracción del ADN se hace teniendo en
cuenta sus propiedades químicas. El ADN es
insoluble en alcohol y en soluciones diluidas
de NaCl, pero soluble en soluciones
concentradas de NaCl y puede disociarse de
las nucleoproteínas con un detergente o con
fenol.
El ADN absorbe en el ultravioleta. Las bases
nitrogenadas delos oligonucleótidos tienen
un máximo de absorción a 260 nm. Usando
una celda de 1 cm de paso de luz, el
coeficiente de extinción del ADN a esta
longitud de onda es de 20. Con base en este
coeficiente de extinción, la absorbancia a 260
nm en una cubeta de cuarzo (1 cm) de una
solución de 50 microgramos/mL de ADN de
doble hélice es igual a 1. Las proteínas tienen
máxima absorción a 280 nm,debido
principalmente a los residuos de aminoácidos
aromáticos.
La pureza del ADN extraído puede
determinarse por el cociente entre la
absorbancia a 260 nm y la absorbancia a 280
nm. Si el valor está entre 1.8-2.0 el ADN está
libre de contaminantes celulares. Valores
inferiores indican contaminación con
proteínas., fracciones de membrana o fenol,
cuando ha sido utilizado para laextracción de
las proteínas.
Las principales etapas en el aislamiento del
ADN son: ruptura de las células por choque

osmótico, digestión enzimática o por un
método mecánico suave, seguido del
aislamiento del núcleo, mitocondrias u otras
estructuras sub-celulares que contenga ADN.
Posteriormente, las proteínas se disocian del
ADN por la acción de un detergente aniónico
o sales concentradas....