determinacion de la poblacion bacteriana

Introducción

Uno de los problemas que se presenta en bacteriología es determinar el número de bacterias viables y recuperables en cultivo, presentes en una población dada, sea ella la de un cultivo puro o la de una muestra de alimento, de suelo o de agua. Los métodos más utilizados para ello son: Método de dilución seriada en tubos, en el cual el resultado se expresa como el Número MásProbable (N.M.P.) de microorganismos presentes en la muestra original. Método de recuento en placa por diseminación en superficie y una variante de él, el método de siembra por microgota, en los cuales se cuenta el número de colonias desarrolladas en cada cultivo y de acuerdo con la dilución utilizada es posible calcular el número de bacterias viables en la muestra. Y por último, el Método dedeterminación de densidad óptica, en el cual se mide la turbidez del cultivo utilizando un espectrofotómetro.
El objetivo del trabajo práctico fue la determinación de la población bacteriana en una muestra de agua de la laguna “Los Patos” mediante los métodos de recuento en placa por diseminación en superficie y microgota.

Principios Metodológicos

En el laboratorio se facilitó una muestra de aguade la laguna “Los Patos” con una población aproximada de 103 o más bacterias por ml, a la que se le determinó la población bacteriana mediante los métodos de dilución seriada en tubos, recuento en placa por diseminación en superficie y siembra de microgota.

1. Método de dilución seriada en tubos:
Se efectuó una dilución de 1 ml de muestra en 9 ml de agua destilada estéril, esta nueva muestrafue diluida de 1 ml en 9 ml de agua destilada, y así sucesivamente hasta obtener 3 tubos con diluciones 1:10, 1:100, 1:1000 (V:V), las que se denominan -1, -2 y -3 respectivamente, y un tubo sin diluir. Los traspasos se efectuaron con pipetas esterilizadas.
2. Método de recuento en placa por diseminación en superficie:
Utilizando las mismas diluciones preparadas anteriormente se sembraronalícuotas de 0.1 ml sobre la superficie del agar tripticasa, incluyendo también una alícuota de la muestra sin diluir, utilizando un rastrillo se realiza la diseminación de superficie. Esta técnica se realizó por duplicado para luego obtener un promedio de las colonias desarrolladas en cada cultivo. Finalmente fueron incubadas por 48 horas a 30°C.

3. Método de recuento en placa por siembra demicrogota:
En el Método de siembra por microgota se utilizaron las mismas diluciones que se obtuvieron en el método de dilución seriada en tubo anteriormente. Se sembraron 20 µL obtenidos con una micro pipeta sobre un agar de tripticasa que fue dividido en cuatro cuadrantes, un cuadrante para cada dilución. En cada división se depositaron 3 gotas de 20 µL de cada dilución. Posteriormente fueronincubadas por 48 horas a 30°C.

Resultados
1. Método de recuento en placa por diseminación en superficie

Tabla N° 1: Resultados obtenidos mediante la diseminación en superficie de diluciones sucesivas de la muestra

Muestra sin diluir
(-1)
(-2)
Dilución
------
10-1
10-2
Número de colonias
Prueba 1
S.C.
58
2
Número de colonias
Prueba 2
S.C.
21
2

*S.C: Sin conteo
Paraobtener las unidades formadoras de colonias (U.F.C.) obtenidas en 1 mL se realizó el siguiente cálculo:
Primeramente debe calcularse el promedio de UFC en ambas pruebas:
Tabla N° 2: Promedios calculados de ambas pruebas:

Muestra sin diluir
(-1)
(-2)
Promedio número de UFC
S.C
39,5
2

Y luego con regla de simple:
Se sabe que hay 39,5 UFC en0,01ml entonces en 1ml habrá 3,95x103 UFC
Se sabe que hay 2 UFC en 0,001ml entonces en 1m habrá 2,0x103 UFC
2. Método de recuento en placa por siembra de microgota:
Tabla N° 3: Número de colonias obtenidas mediante recuento en placa por siembra de microgota

Muestra sin diluir
(-1)
(-2)
(-3)
Disolución
--------
10-1
10-2
10-3
Número de colonias
13
3
-
-

Determinación de...