Det. Poblacion Bacteriana

Determinación de la población bacteriana

Introducción
El objetivo principal del trabajo practico es determinar o estimar el numero de bacterias viables en cultivo, presentes en una población dada, así como también conocer los métodos que existen para realizar esto.de los métodos empleados, los más utilizados son: método de dilución seriada en tubos; método de recuento en placa pordiseminación en superficie, método de recuento en placa por siembra de microgota y determinación de densidad óptica(1).
A través de este práctico se busca también encontrar relación entre los procesos utilizados y lo que un ingeniero ambiental puede realizar con estos, para determinar cuántos microorganismos se encuentran en un determinado lugar.
La dilución seriada en tubos consiste en sembrar alícuotas dediluciones sucesivas de una muestra, en tubos de ensayo con medio liquido (agua); esto nos permite tener una estimación de la población bacteriana. Se expresa como el numero más probable.(1)
El método del número más probable es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo. Luego, seincuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. Al aumentar el factor de dilución, se alcanza un punto en el que algunos tubos contendrán tan sólo un microorganismo y otros tubosno contendrán ninguno. Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna célula, se puede estimar el numero más probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadística. Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de colonias, o el caro y tedioso recuento microscópico (2).
El método de recuento en placapor diseminación en superficie, consiste en sembrar alícuotas de 0,1 ml de las disoluciones sucesivas en la superficie de agar-agar (los cuales tienen los nutrientes para que las bacterias se mantengan en ese medio y den origen a colonias. Luego se cuentan las colonias formadas y se calcula el número de bacterias en la muestra original. El método de siembra por microgota es similar, solo que lasalícuotas con de 20 ul de la muestra.(1)
El método de la determinación de densidad óptica funciona en base a la turbidez que presenta el cultivo, esto se logra a una longitud de onda específica. Esta técnica no nos permite conocer el número exacto de células pero el aumento de esta turbidez demuestra que el crecimiento bacteriano está incrementando.

Metodología
En el practico se nos dio unamuestra de agua de la laguna los patos con una muestra aproximada de 10^3 o mas bacterias por ml. Nuestro objetivo fue determinar la población bacteriana de esta.
A través del método de dilución seriada y como se explico anteriormente, realizamos diluciones de manera seriada, generalmente diez veces por cada dilución, una muestra del cultivo, en 3 tubos de ensayos con liquido para diluir (agua) 9ml, esto se hizo con pipetas esterilizadas y cada extracción se realizo con una mueva. Estas extracciones se sembraron en los tubos, se marcó y luego fueron incubadas a 30ºC por un tiempo determinado para que se generaran colonias. No realizamos la observación de la turbidez luego de esta incubación, solo al momento de ingresar cada alicuota. Comenzamos extrayendo de la muestra original y luego delos tubos de ensayo, disminuyendo la cantidad de bacterias.

Para el método de recuento en placa por diseminación, con las mismas soluciones depositamos 0,1 ml con una micropipeta. Dividimos la superficie del agar R2A en 4, cada recuadro fue base de una dilución en particular (incluyendo la muestra original) y se depositaron 3 gotas de 0,1 ml en cada uno de estos.

También se realizo una...