Determinación de microorganismos viables


























PRÁCTICA N° 03
DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS VIABLES
MÉTODO INDIRECTO: REDUCCIÓN DEL COLORANTE O PRUEBA DE REDUCTASA

I. INTRODUCCIÓN

Uno de los alimentos naturales donde proliferan con facilidad la mayor parte de los microorganismos y bien se podría aceptar como un medio de cultivo, es la leche. Los microorganismos en laleche actúan como indicadores y su investigación y cuantificación nos puede aportar información sobre aspectos comerciales, la seguridad sanitaria del alimento, su grado de alteración, la bondad de su proceso de elaboración, etc.
Un análisis microbiológico evidencia si hay o no riesgo que el alimento pueda suponer para la salud del consumidor, de haber presencia de microorganismos patógenos o desus toxinas, también verifica que exista o no una correcta conservación del producto lo que es determinado por la presencia de un mayor o menor número de flora saprofítica, produciendo defectos y disminución de las propiedades productivas y organolépticas del producto.
El desarrollo de métodos rápidos para evaluar la calidad sanitaria de la leche y sus productos constituye en la actualidad unanecesidad enfocada en la obtención de resultados en menor tiempo posible para tomar las medidas correctivas antes de que el producto sea liberado en el mercado.
El método usado en esta práctica es la Reducción de Colorantes, estas pruebas se fundamentan en como por el metabolismo microbiano hace variar el potencial de óxido reducción de la leche. Para ello se utilizan como indicador el azul demetileno y la Resazurina, los cuales van variando su coloración a medidad que se van reduciendo.

II. OBJETIVOS
Determinar la presencia de microorganismos viables por el método de reducción del colorante.
Establecer si la muestra de leche es apta o no apta para el consumo mediante la prueba de reductasa
Familiarizarse con el método de reducción del colorante usando el procedimiento y la técnicaadecuada.
III. FUNDAMENTO TEÓRICO

El método de reducción de azul de metileno es un método indirecto para calcular el contenido total de bacterias de la leche. De manera que en lugar de contar las bacterias se establece una correlación entre el tiempo que se necesita para reducir el colorante de Azul de Metileno en la leche a una forma incolora y la probable población bacteriana de la muestra,Por lo general, el tiempo que se necesita para la reducción del colorante, es inversamente proporcional al número de bacterias presentes en la leche.

El Mecanismo de la reducción del colorante durante la prueba, se fundamente en el proceso respiratorio de las bacterias, elimina oxígeno de la leche, provocando un cambio en el potencial óxido-reducción, puesto que, por lo general, el oxígenomantiene un potencial positivo, y que, a medida que el potencial va cayendo, el hidrógeno pasa de los elementos constitutivos de la leche y de los metabolitos al azul de metileno causando su reducción.



IV. MATERIALES

Material biológico:
Muestra de leche fresca

Material de laboratorio:
Tubos de ensayo estériles con tapa rosca
Pipetas graduadas de 1 ml. y 10 ml.
Tubos de ensayoGradilla de acero inoxidable
Cronómetro
Colorante Azul de Metileno

Equipos de laboratorio:
Baño de agua (Baño María) de preferencia con termostato, mantener a una temperatura de 37° C





V. PROCEDIMIENTO
1. Encender el mechero para proceder a trabajar en condiciones asépticas.
2. En un tubo estéril pipetear 1 ml. de solución de azul metileno



3. Etiquetar los tubos de formainteligible e imborrable y posterior a ello adicionar 10 ml. de leche fresca (homogenizada 20 veces)




4. Tapar los tubos e invertirlos (mezclar) y ligeramente desenroscado colocarlo en Baño de agua a 37 °C sin permitir que varíe la temperatura.


5. Elaborar dos controles, un control positivo y un control negativo. Para ambos hervir la muestra de leche.
Al tubo de control positivo se le...