DOCUMENTOS_CIENCIA

Establecimiento in vitro de frutos inmaduros a partir de semillas de Limón (Citrus limonum) para la obtención de plantas monoploides


RESUMEN

El limonero (Citrus limonum) es un pequeño árbol frutal que puede alcanzar más de los 4 m de altura. Su fruto es el limón, de sabor ácido y extremadamente fragante. Dentro del fruto se encuentran contenidas las semillas, que son embriones inmaduroscuando el fruto aún no ha completado su período de madurez. El limón es muy demandado a nivel mundial ya que posee propiedades estéticas, además de propiedades medicinales debido a su alto contenido de vitamina C y ácido cítrico, por lo que es muy utilizado en la industria. A partir de las semillas de limón se puede desarrollar la técnica de cultivo in vitro de frutos inmaduros o embrionesinmaduros. El cultivo de embriones ha sido usado con diferentes propósitos: estudiar el requerimiento nutricional del embrión en desarrollo, rescatar embriones híbridos provenientes de cruzamientos interespecíficos, producir monoploides y superar la latencia de semillas. Los embriones inmaduros constituyen semillas no acabadas de madurar, las cuales pueden ser cultivadas mediante técnicas in vitro con elfin de impedir el aborto embrionario y de esta forma obtener una planta viable. Partiendo de 5 limones inmaduros se desarrolló el proceso de lavado con agua corriente y el proceso de desinfección con una solución de detergente al 2% (en agitación por 20 minutos), dos lavados con agua destilada y uno con agua estéril, y finalmente se usó una solución de cloro al 5% más cinco gotas de Tween 20 (enagitación por 10 minutos). En cámara se realizaron dos lavados con agua estéril y mediante cortes se obtuvieron los explantes, es decir las semillas de cada limón. Se sembraron de 3 a 4 semillas por frasco, resultando un total de 8 frascos. Cada frasco contenía medio MS enriquecido con 2mg/L de KIN, 0.5mg/L de AIA, 100mg/L de mioinositol, 30g/L de azúcar y 7.5g/L de agar; se ajustó el pH entre 5,7y 5,8. De un total de 24 embriones cultivados in vitro, un 4,16% mostraron respuesta evidenciada por la apertura del tegumento de la semilla, mientras que el 12,5% mostró contaminación fúngica. El 83,34% restante se consideró aún viable, ya que los explantes no mostraron contaminación ni oxidación; se sugiere mantenerlos en observación por más tiempo.

Palabras clave: Limonero, Citrus limonum,Cultivo in vitro, frutos inmaduros, plantas monoploides.

INTRODUCCIÓN
El limonero, Citrus limonum, es un pequeño árbol frutal que puede alcanzar más de los 4 m de altura. Sus hojas son elípticas, coriáceas de color verde mate lustroso (longitud entre 5 y 10 cm), terminadas en punta y con bordes ondulados o finamente dentados. Sus flores, comúnmente llamadas azahares o flores deazahar, presentan gruesos pétalos blancos teñidos de rosa o violáceo en la parte externa, con numerosos estambres (de 20 a 40). Su fruto es el limón, de sabor ácido y extremadamente fragante, posee un alto contenido en vitamina C y ácido cítrico y es ampliamente usado para la alimentación. Dentro del fruto se encuentran contenidas las semillas, que son embriones inmaduros cuando el fruto aún no ha completado superíodo de madurez (Bernal et al., 2001; León, 2000). El limón es muy demandado a nivel mundial ya que posee propiedades estéticas: se usa para blanquear las manos, para dar brillo y suavidad al cabello, así como para hacer un peeling. Además, posee propiedades medicinales debido a su alto contenido de vitamina C y ácido cítrico, por lo que es muy utilizado en la industria (León, 2000). A partir delas semillas de limón se puede desarrollar la técnica de cultivo in vitro de frutos inmaduros o embriones inmaduros. El cultivo de embriones ha sido usado con diferentes propósitos: estudiar el requerimiento nutricional del embrión en desarrollo, rescatar embriones híbridos provenientes de cruzamientos interespecíficos, producir monoploides y superar la latencia de semillas (Roca et al.,...